목재의 펄프화는 폐기물을 최소화하는 시스템을 만들기 위해 수년에 걸쳐 최적화된 화학적 집약적인 공정입니다. 그러나 이 프로세스의 일부 출력은 더 높은 가치의 제품을 생산하는 데 사용될 수 있습니다. 흑주가 그러한 예 중 하나입니다. 이는 세계 리그닌 생산량의 85%를 차지하는 지배적인 화학적 펄프화 방법인 크라프트 공정에서 생성됩니다1. 크라프트 공정(그림 1)은 온도(160-200°C), 압력(120psig) 및 백색 액체(수산화나트륨 및 황화나트륨)에 포함된 화학 물질을 사용하여 목재 섬유2,3에서 리그닌을 용해합니다. 흑액에는 리그닌, 유기산 및 다당류 분해 부산물이 포함되어 있습니다4. 다운스트림 제지 및 펄프 화 공정에 열 에너지를 제공하는 회수 보일러에서 증기를 생산하고 화학 물질을 회수하기 위해 소각됩니다. 펄프화에 의해 생성되는 흑액의 양은 회수 보일러가 효과적으로 처리할 수 있는 양을 초과할 수 있습니다. 흑액을 폐수로 처리하는 것은 수생 동식물에 부정적인 영향을 미치므로 선택 사항이 아닙니다. 성장을 위해 흑액을 사용할 수 있는 미생물 유기체를 적용하면 화학적 회수를 증가시키고 펄프화 시스템의 전체 수명 주기 분석을 개선할 부가가치 제품의 생성 측면에서 도움이 될 것입니다. 리그닌 유래 단량체의 화학적 및 생물학적 전환은 식품 감미료 및 향료 첨가제로 사용되는 바닐린과 계피산, 플라스틱 및 수지에 사용되는 페놀, 연료로 사용할 수 있는 시클로헥산을 성공적으로 생산했습니다5.

이 펄프 폐기물의 생분해에 대한 이전 연구는 리그닌 해중합에 중점을 두었습니다. 국제 리그닌 연구소(International Lignin Institute, ILI)는 매년 4천만-5천만 톤의 리그닌이 생산된다고 보고합니다(http://www.ili-lignin.com/aboutlignin.php). 그 리그닌 중 1.5%만이 상업적 산업 공정에 사용됩니다6. Phanerochaete 및 Trametes 속의 백색 부패 균류에 의해 생성된 laccase 및 peroxidase 효소에 의한 리그닌 해중합이 자세히 연구되었습니다7. 노카르디아(Nocardia)와 로도코커스(Rhodococcus)8, 슈도모나스 푸티다 mt-29, 스트렙토마이세스 비리도스포루스 T7A10과 같은 방향족 화합물을 분해하는 것으로 알려진 토양 박테리아도 리그닌을 분해할 수 있는 것으로 나타났습니다. 펄프 폐기물의 박테리아 분해는 일부 박테리아가 펄프 폐기물 폐수를 특징짓는 염분 및 알칼리성(pH 10-14) 조건에서 번성할 수 있기 때문에 유망합니다11. 리그닌은 흑액의 주성분이지만 미생물은 흑주를 구성하는 다른 성분을 분해할 수도 있습니다. 이러한 기술은 리그닌을 분해하는 미생물을 독점적으로 식별하는 것이 아니라 추가 처리된 성분 대신 펄프 폐 흑액에 직접 적용할 수 있는 미생물을 식별하는 역할을 합니다.

검은 액체는 중화 및 여과 살균을 통해 미생물 성장을 위해 수집 및 변형되었습니다. 새로운 리그노셀룰로오스 추출 프로토콜에 의해 생성된 리그노셀룰로오스 성분에 대한 최소한의 배지 성장 실험을 통해 환경 미생물 분리물에 대한 미생물 성장 요구 사항이 확인되었습니다. 성장 배지는 가스 크로마토그래피-질량 분석법(GC-MS)으로 분석하여 흑액을 유일한 탄소원으로 성장시킬 때 환경 미생물 분리물의 대사 산물을 측정했습니다. 이러한 기술의 조합은 흑액과 같은 펄프 공장 폐기물에서 자랄 때 미생물의 대사 능력을 결정하기 위한 평가 도구를 제공합니다. 이러한 기술의 사용은 또한 부산물 생성을 위해 펄프 공장 폐기물에 특정 미생물을 적용하는 가치에 대한 통찰력을 제공합니다.

다음 실험의 전반적인 목적은 미생물 또는 미생물 군집이 펄프 제조 폐기물인 흑액(Black Liquor)을 성장을 위해 이용하는 능력, 성장에 이용되는 흑액의 성분, 그리고 이 펄프 제조 폐기물의 미생물 대사로 인해 생성되는 산물을 결정하는 것입니다. 이는 펄프 제조 폐기물인 흑액을 수집하여 배지 성분으로 사용할 수 있도록 준비함으로써 이루어집니다. 두 번째 단계로, 미생물의 탄소원 요구량을 결정하는 데 사용되는 리그노셀룰로오스 성분을 추출합니다.

미생물이 흑액 및 그 성분에서 성장할 수 있는 능력을 결정하기 위해, 다음 배지를 준비하고 접종하여 미생물의 성장을 분석합니다. 결과는 최소 배지 한천 플레이트에서 관찰된 성장과 GCMS 분석을 통해, 미생물 환경 분리주가 성장을 위한 유일한 탄소원으로서 흑액을 이용하고 대사 산물을 합성함을 보여줍니다. 우리는 펄프 폐기물에서 미생물이 성장할 가능성과 펄프 공장에서 이러한 미생물을 직접 분리할 수 있을 것이라는 가능성을 논의했을 때 처음으로 이 방법에 대한 아이디어를 얻었습니다.

수산화나트륨 표백과 같은 기존 방식에 비해 zignal 셀룰로오스 추출 기술의 주요 장점은 염화나트륨 표백이 더 높고 향상된 순도를 제공한다는 점입니다. 이 방법의 시각적 시연은 매우 중요합니다. 셀룰로오스 및 GCMS 시료 준비 단계는 요구되는 단계가 많고 공정 완료를 확인하기 위한 시각적 판단이 필요하기 때문에 학습하기 어렵습니다.

이 방법은 흑액의 미생물 분해에 대한 통찰력을 제공할 뿐만 아니라, 작물 잔해, 산림 잔해 및 도시 고형 폐기물과 같이 마그노 셀룰로오스 물질을 포함하는 산업 폐수 스트림에도 적용될 수 있습니다. 이 절차를 시작하려면, 펄프 솥의 배출 밸브에서 흑액 샘플을 멸균 유리병에 수집하고, 다음 단계로 넘어가기 전에 실온으로 식히십시오. 그다음, 교반 바가 장착된 500 milliliter 비커에 흑액 샘플 100 milliliters를 넣고 중간 속도로 교반하십시오.

점성이 생길 때까지 인산을 한 방울씩 첨가하여 흑액을 중화합니다. 그 다음, 모든 흑액 용액을 50 milliliter 원심분리관에 분주하고 9,300 Gs에서 30분 동안 원심분리합니다. 탄수화물을 분리하기 위해 1 millimeter 이하로 분쇄된 스위치그라스 5 gram과 마그네틱 바를 500 milliliter 플라스크에 넣습니다.

그 다음 증류수 200 milliliters, 아염소산나트륨 7.5 gra