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Biology II: Mouse, Zebrafish, and Chick

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제브라피쉬 사육 및 배아 가공

Overview

Zebrafish(Danio rerio)는발달 생물학 연구에 특히 중요한 중요한 모델 유기체입니다. Zebrafish는 매우 비옥하며 주당 수백 마리의 자손을 생산할 수 있으므로 높은 샘플 수에 대해 많은 수의 배아를 수집하는 것이 비교적 쉽습니다. 또한, 제브라피쉬는 급속한 발달을 거치고 배아는 투명하여 발달 과정을 쉽게 시각화할 수 있습니다.

이 비디오는 새로 수정 된 제브라피시 배아의 수집에 필요한 단계를 다룹니다. 제브라피쉬 짝짓기 행동에 대한 간략한 개요가 제시되고, 그 다음에는 특수 실험실 사육 탱크에 십자가를 설치하여 상호 결합을 제어할 수 있도록 하는 지침이 제시됩니다. 또한 탱크가 설정된 후 아침에 계란 (산란이라고 함)의 방출을 시작하는 데 필요한 조건이 다룹니다. 다음으로, 화학 PTU를 가진 안료 발달의 억제를 포함하여 배아와 함께 일하기 위한 필수적인 기술이 제시되고, 불반향: 배아를 둘러싼 껍질 과 같은 막(chorion)이 제거되는 절차. 마지막으로, 비디오는 개발 연구에서 이러한 기술의 몇 가지 실용적인 응용 프로그램으로 끝납니다.

Procedure

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Zebrafish는 작지만 강력한 모델 시스템입니다. 이 다산 물고기는 일주일에 수백 개의 자손을 생성할 수 있으며 일생 동안 수천 마리의 자손을 생성할 수 있습니다. 급속한 외부 발달 및 투명한 바디는 배아를 다양한 응용에 이상적으로 만듭니다. 이 비디오는 제브라피시 배아를 활용하는 현재 연구 방법을 설명하기 전에 배아 수집 및 처리의 기초를 다룰 것입니다.

배아를 생성하기 위해, 그것은 제브라피시 짝짓기 행동에 대해 조금 아는 데 도움이됩니다.

제브라피쉬는 성재생을 거치므로 번식하려면 남성과 암컷 물고기가 모두 필요합니다. 남성은 약간 붉은 색조로 날씬한 몸매를 가지고 있으며, 암컷은 달걀로 가득 찬 더 크고 은색 배를 가지고 있습니다.

주기적인 짝짓기는 계란을 건강하게 유지하지만 모든 계란을 만드는 데는 많은 작업이 필요하므로 개별 여성은 일주일에 한 번만 짝짓기해야합니다.

마지막으로, 다른 많은 동물과 마찬가지로 감각 프로세스는 물고기의 짝짓기 행동을 안내합니다.

남성의 도움으로 후각 단서는 그의 여자 친구가 생성 할 준비를하고, 약간의 기분 조명은 둘 다 행동하도록 합니다.

남성과 여성의 물고기를 식별하는 방법을 배운 데, 그것은 십자가를 설정하는 시간이다.

제브라피시 사육의 경우 연구자들은 짝짓기를 위해 특별히 설계된 탱크를 사용합니다. 사육 탱크는 일반적으로 계란을 통해 떨어질 수 있도록 구멍이있는 탈착식 인서트를 특징으로합니다. 이 기능은 배고픈 성인 물고기에 의해 먹는 계란을 보호합니다.

시작하려면 오후 나 저녁에 번식 탱크에 성인 물고기를 결합합니다. 다음 날 아침 초기 단계 배아를 수집하려면, 분리와 함께 남성과 여성 물고기를 분리, 당신은 실험을 시작하기 전에 번식에서 그들을 중지. 물고기가 튀어 나오지 않도록 하려면 사육 탱크를 뚜껑으로 덮어야 합니다. 그런 다음, 하룻밤 사이에 서로 적응하기 위해 물고기를 둡니다.

번식 탱크에서 함께 밤을 보낸 후, 물고기는 다음 날 아침 짝을 것입니다.

아침에 첫 번째 단계는 산란을 시작하기 위해 남성과 여성 물고기 사이의 분리기를 제거하는 것입니다. 칸막이가 사용되지 않으면 물고기가 빛이 발병한 직후에 알을 낳습니다.

수컷이 탱크 주변의 암컷을 쫓는 동안, 그들은 수정을 위해 물에 정자를 방출하는 동안 계란의 산란을 자극한다. 생선에게 짝짓기를 할 시간을 주기 위해 칸막이를 당긴 후 약 15 - 30 분 기다립니다. 그런 다음, 그물을 사용하거나 탱크 삽입을 들어 올리고 다른 탱크에 물고기를 배치하여 탱크에서 성인을 제거합니다.

다음으로, 수집을 위해 메쉬 차 여과기를 통해 물과 배아를 붓습니다. 그런 다음 "달걀 물"을 사용하여 여과기에서 배아를 페트리 접시로 씻어 넣습니다. 요리당 50-100의 최적 밀도를 달성하기 위해 요리 사이에 배아를 옮길 필요가 있을 수 있습니다. 개발이 정상적인 속도로 진행되도록 하려면 28.5°C의 인큐베이터에 접시를 배치하십시오.

배아가 있으면 조심스럽게 처리하십시오. 그들은 당신의 실험에 중요합니다! 일부 포인터를 살펴보겠습니다.

배아를 건강하게 유지하려면 페트리 접시에 물을 깨끗하고 이물질이 없도록 하십시오. 죽은 배아는 불투명하고 매일 제거해야합니다. 또한, 메틸렌 블루는 곰팡이 성장을 방지하기 위해 물에 추가 될 수있다.

배아를 한 접시에서 다른 접시로 이동해야 할 때마다 이송 파이프를 사용하십시오. 접시를 소용돌이면 배아를 접시 중앙에 농축하여 파이프팅을 더 쉽게 만들 수 있습니다.

일부 프로토콜은 배아 유지 보수를 위한 몇 가지 추가 단계가 필요합니다. 생활의 첫번째 3 일 동안, 제브라피쉬 배아는 태아의 조작을 방해할 수 있는 초리온의 안쪽에 발전합니다. 초리온은 프로테오리틱 효소, pronase, 또는 수동으로 제거하기 위해 포셉을 사용하여 치료에 의해 제거 될 수있다. 또한, 제브라피쉬는 현미경 검사를 방해할 수 있는 이 제브라피시 애벌레에서 와 같이 24시간까지 안료를 개발하기 시작합니다. 이 문제를 통해 볼 수, 과학자들은 PTU와 배아 물을 보충, 이는 안료 멜라닌의 생산을 억제.

이제 Zebrafish 배아를 얻고 돌보는 방법을 알고 있으므로 연구자들이 과학적 발견을 위해 사용하는 몇 가지 방법을 살펴보겠습니다.

제브라피시 배아의 외부 발달은 DNA, RNA 또는 유전자 녹다운 시약의 미세 주입에 의한 유전 적 조작을 허용합니다. 이 방법은 배아 전체에 주입된 물질의 균일한 분포로 이어져 단백질의 과발현 또는 손실로 인한 눈에 보이는 표현형을 생성할 수 있다. 동일한 기술은 또한 특정 구조물이 형광 단백질의 발현에 의해 표시되는 형질 전환 물고기를 만들기 위하여 이용될 수 있습니다.

또한, 제브라피시 배아와 유충의 작은 크기는 현상 화학 적 검사에 이상적입니다. 여기서 배아는 96웰 플레이트에 적재된 다음 화학 물질을 물에 추가하여 작은 분자 라이브러리로 처리합니다. 나중에, 물고기의 이 판은 여기에 표시된 이상한 발달과 같은 형태학적 결함을 위해 검열됩니다.

마지막으로, 제브라피시 배아의 투명성은 현미경 검사법에 적합합니다. 특정 세포 모형에 있는 형광성 단백질을 표현하는 살아있는 태아는 응초점 현미경으로 장착하고 시각화될 수 있습니다, 연구원이 시간이 지남에 따라 조직을 개발하는 세포 운동을 검토할 수 있도록.

당신은 제브라피시 사육 및 배아 처리에 대한 JoVE의 비디오를 방금 보았습니다. 이 비디오에서는 짝짓기, 번식 탱크 설정 및 배아 처리의 기본 사항에 대해 논의했습니다. 우리는 또한 이 강력한 작은 배아를 이용하는 몇몇 연구 방법에 토론했습니다. 시청해 주셔서 감사합니다!

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