Overview
El pez cebra (Danio rerio) es un sistema potente modelo vertebrados para estudiar desarrollo, modelado de enfermedades y detección de nuevas terapias. Debido a su pequeño tamaño, gran cantidad de pez cebra puede ser ubicado en el laboratorio a bajo costo. Aunque pez cebra son relativamente fáciles de mantener, especial considerar a dieta y agua de calidad a fin de optimizar el éxito reproductivo y salud de peces.
Este video le proporcionará una visión general de la cría de pez cebra y mantenimiento en el laboratorio. Después de una breve revisión del hábitat natural de pez cebra, se discutirán técnicas esenciales para recrear este ambiente en el laboratorio, incluyendo elementos clave de los sistemas de recirculación de agua de instalaciones de pescado y la preparación de camarón de salmuera como parte del pez cebra dieta. Además, la presentación incluirá información sobre lo específico de pez cebra cepas se realiza el seguimiento en un entorno de laboratorio, con especial referencia a la colección de muestras de aleta de la cola para la extracción de ADN y genotipificación. Finalmente, se discutirán modificaciones experimentales del pez cebra medio ambiente como un medio para fomentar nuestra comprensión de estos peces y a su vez, nosotros mismos.
Procedure
Cría adecuada es esencial para el éxito de los experimentos llevados a cabo en el pez cebra. Calidad óptima del agua promueve la salud de los peces y reproducibilidad experimental. Además, la producción de huevos de pez cebra es depende en gran medida de una nutrición adecuada. Este video describe cómo pescados son alojados y alimentados en el laboratorio, consejos sobre el manejo y gestión de stocks y un vistazo a cómo se manipula el ambiente del pez cebra en experimentos biológicos.
Comencemos por repasar los conceptos básicos de lo hábitat de peces.
Pez cebra salvaje originan aguas frescas del Himalaya. En este clima, los peces pasan la mayor parte de sus días tomando lento cuerpos de agua dulce.
¿Cómo es este paraíso recreado en el laboratorio? Vamos a empezar con la parte más importante: el agua. Aunque se parezca fácil de obtener agua dulce, agua del grifo es tóxico para los peces cebra debido a contaminantes cloro y potencial. Por lo tanto, el agua del acuario se debe pasar a través de un sistema de purificación, como una unidad de ósmosis inversa. Sales y buffers de pH se agregan luego hacia el agua purificada para optimizar el pH y la salinidad.
Para maximizar la eficiencia experimental, muchos peces se mantienen en una cantidad limitada de agua. Basura se acumula rápidamente con todos los peces nadando alrededor, haciendo cambios de agua esencial. Esta necesidad crea una demanda de agua, para que instalaciones de pescados utilizan un sistema de recirculación para reducir al mínimo el uso del agua. Agua sucia es filtrado y esterilizado por tratamiento UV antes de desembocar en el sistema.
Pez cebra se mantienen en tanques especializados, que están disponibles en varios tamaños. Los tanques están cubiertos para reducir la evaporación y evitar el escape de peces. Para permitir que el tanque a integrar en el sistema, la tapa tiene agujeros por donde el agua limpiado fluye constantemente. El nivel del agua permanece estable gracias a un puerto de desbordamiento en la parte posterior del tanque, que está cubierto por un deflector con pequeños agujeros que permiten el agua sucia, pero no de pescado, para fluir hacia fuera.
A pesar del intercambio de agua, algas y residuos sólidos pueden todavía se acumulan en los tanques, por lo que necesitan ser limpiados regularmente.
Control ambiental en instalaciones de pescado también es muy importante. Temperatura se mantiene cerca de 28 ° C y 80 ° F. Para mantener el ritmo circadiano de los animales, las luces son controladas en un ciclo con 14 horas de luz y 10 horas de oscuridad.
Ahora que hemos pasado en pez cebra las condiciones de vivienda, vamos a hablar de su dieta.
En su hábitat natural, pez cebra en gran medida consumen zooplancton y los insectos. Esta dieta es recreada en el laboratorio por una combinación de alimentos secos y pequeños organismos. Larvas y juveniles de peces prosperan en microorganismos como el paramecio, mientras que los peces adultos a menudo son alimentados polvos disponibles en el mercado y pequeños crustáceos conocidos como camarón de salmuera.
Estos bichos son particularmente susceptibles a la preparación de laboratorio, porque los huevos pueden almacenarse como quistes inactivos a temperatura ambiente. Para preparar los camarones para comer, la cáscara externa dura se eliminan por tratamiento con lejía. A continuación, decapsulated huevos se lavan bien. Los huevos se transfieren a una torre de aireación para permitir crecimiento en agua salada durante aproximadamente un día. Por último, la gamba rayada es recogida y enjuagarse en un colador de malla y luego en botellas para la alimentación. Peces son alimentados generalmente 2 - 3 veces al día, alternando alimento vivo y seco, y el flujo de agua se apaga durante este período para que los alimentos no flotan antes de ser comido.
Ahora que sabes albergar y alimentar a peces, es tiempo para aprender a trabajar con y seguimiento de sus poblaciones de peces.
Laboratorio de peces instalaciones casa muchos tipos diferentes de pez cebra, de cepas de tipo salvaje, para los peces cuyos genomas se han modificado con mutaciones de punto disruptivas e insertado los transgenes. Para hacer un seguimiento de todos estos peces, animales con antecedentes genéticos similares se mantienen juntos en depósitos etiquetados. Etiquetas del tanque deben contener información de identificación completa, incluyendo el pescado genotipo y fecha de nacimiento.
Pez cebra la fertilidad comienza a decaer tras el primer año de vida, así que las acciones deben ser reemplazados anualmente. Pez cebra no sobreviven bien como cepas consanguíneas completamente, para que diversidad genética debe ser mantenida por recogida de progenie de la cruza de pescado sin relación o "outcrosses."
Cuando exogamia líneas transgénicas o mutantes, progenie teniendo la modificación genética deseada debe identificarse por la expresión de fluoróforo o genotipificación. Genotipo, primero anestesiar los peces Metanosulfonato. Luego, cortar un pequeño trozo de la aleta caudal como fuente de ADN.
Finalmente, aislar ADN de la muestra de cola y utilizarlo para el análisis PCR para identificar secuencias específicas. Espera de los resultados, mantener cada pescado en su propio pequeño tanque etiquetado con un identificador.
Ahora que hemos pasado en peces estándar condiciones de cría, vamos a ver algunas maneras de que estas normas son manipuladas para estudiar procesos biológicos.
La temperatura del agua sistema profundamente puede afectar la salud de pez cebra. Para crear un modelo de diabetes mellitus, estos investigadores tratan peces con la toxina pancreática, estreptozocina y casa en depósitos con temperatura reducida. El pescado diabético muestra fenotipos esperados, como el riñón y daño ocular, así como regeneración de la aleta caudal reducida y puede utilizarse para estudiar la biología de la diabetes.
Sistemas de tanque pueden modificarse también para los propósitos experimentales específicos. Estudios de comportamiento de la natación en los peces pueden utilizarse como una lectura para la ansiedad, agresión o comportamientos sociales. Aquí, video tracking se utiliza para analizar la diferencia en comportamiento para nadar entre peces sin tratar y los tratados con fármacos neuroactivos. Estudios como estos ayudan a avanzar en nuestra comprensión de la neurociencia y pueden ser una herramienta de descubrimiento de fármacos.
Alteración de las condiciones de luz también pueden afectar peces cebra. Tratamiento con luz intensa puede utilizarse incluso para extirpar las células sensibles a la luz de la retina. Estos peces tienen la capacidad de reparar el tejido retiniano dañado por proliferación celular, que es de gran interés para los científicos investigando la degeneración retiniana en las personas.
Sólo ha visto video de Zeus en la cría y mantenimiento de pez cebra. Nos hemos ido lo esencial de cómo peces son alojados, alimentados y logrados en el laboratorio. ¡Gracias por ver!
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