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Biology II: Mouse, Zebrafish, and Chick

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Introduzindo agentes experimentais no mouse

Overview

Muitas investigações realizadas em camundongos (Mus musculus) exigem a administração de um agente experimental para o animal. Por exemplo, pode ser de interesse testar a eficácia de uma terapia específica, induzir uma condição patológica ou administrar anestesia ou cuidados paliativos. Para garantir uma entrega segura e eficiente, é importante considerar uma variedade de fatores antes da administração do tratamento.

Este vídeo, que revisa a administração do agente no mouse, começa destacando propriedades a considerar, como viscosidade, dose e palatabilidade, ao planejar a administração de um agente experimental. A discussão subsequente se concentra nos métodos de injeção, incluindo a delineação dos componentes estruturais da seringa e da agulha, como interpretar o medidor de agulhas e métodos seguros de contenção do rato para locais comuns de injeção. Instruções detalhadas são fornecidas para a realização de injeções subcutâneas (SC/SubQ), intraperitoneal (IP) e veia da cauda (IV) em camundongos. Além disso, são discutidas aplicações dessas técnicas, bem como rotas alternativas de administração.

Procedure

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Muitos experimentos dependem da administração de agentes para ratos. Frequentemente, esses agentes são introduzidos para testar seu efeito em um processo biológico. Os agentes também podem desempenhar um papel importante na preparação de animais para experimentação. Neste vídeo, discutiremos importantes considerações para a administração de agentes experimentais, ferramentas para entrega de agentes, algumas rotas específicas de administração e aplicações dessas técnicas essenciais.

Então, quais fatores devem ser considerados ao planejar a administração de um agente experimental?

A primeira é a dose apropriada. Normalmente calculado em relação ao peso do animal, fornecer a dose correta de um agente é crítico.

A rota da administração também é importante a considerar. Propriedades como palatabilidade do agente, viscosidade, a quantidade a ser administrada, o tecido alvo e a taxa de disseminação desejada determinarão qual das muitas rotas de administração disponíveis você deve escolher. Neste vídeo vamos focar na injeção, que é um dos métodos mais eficientes de entrega de agentes.

Antes de discutir como realizar uma injeção, vamos nos familiarizar com as principais ferramentas para a técnica.

Começaremos com a seringa. Os líquidos são mantidos dentro do barril, que é marcado para permitir medições precisas de volume. O êmbolo se encaixa dentro do barril e é usado para conduzir o movimento de seu conteúdo. Por fim, a ponta da seringa é o local de fixação do cubo de agulha. Na extremidade oposta do eixo da agulha você encontrará uma ponta chanfrada. Cuidado, é muito afiado!

Os hubs de agulha são codificados por cores para refletir seu tamanho, ou "gauge", com números de bitola mais altos indicando agulhas menores. Os medidores são escolhidos com base na rota desejada de entrega: quanto menor ou mais sensível a área, menor a agulha necessária.

Depois de selecionar a agulha e a seringa apropriadas para o seu experimento, desenhe o agente no barril puxando para trás no êmbolo. Bolhas de ar injetadas junto com o agente podem interromper tecidos e prejudicar o animal experimental. Portanto, inverta a seringa e gire suavemente o barril, de modo que quaisquer bolhas se movam em direção à ponta e escapem. Se possível, expulse algum agente em excesso para garantir que as bolhas sejam completamente removidas.

Agora que sua seringa está trancada e carregada, você está quase pronto para executar uma injeção!

Antes de começar, é importante equipar-se com os equipamentos de proteção individual apropriados, incluindo luvas. O manuseio adequado dos animais também é essencial, e varia ligeiramente dependendo do local de injeção utilizado.

Para injeções subcutâneas, que muitas vezes são alvos abaixo da dermis do pescoço do animal, os ratos são contidos por "scruffing". Primeiro, segure o animal pela cauda e deixe-o segurar a tampa da gaiola. Então, segure firmemente o escroto, levantando uma tenda de pele sobre os ombros do animal.

A agulha deve ser inserida na base da pele da tenda, e o agente dispensou uma pressão firme e consistente ao êmbolo. O líquido injetado será lentamente absorvido na corrente sanguínea.

As injeções intraperitoneais na cavidade corporal são absorvidas a uma taxa semelhante à ingestão. Para acessar o abdômen, vire o animal escroto e coloque a cauda firmemente sob seu mindinho.

Em seguida, divida mentalmente o abdômen do animal em 4 quadrantes e insira a agulha no quadrante inferior esquerdo ou direito. Aplique pressão firme e consistente ao êmbolo para entregar até várias centenas de microliters de agente. Alternativamente, injeções intravenosas permitem uma entrega mais eficiente e sistêmica de agente experimental.

As injeções intravenosas são mais comumente realizadas nas veias traseiras. Primeiro, os ratos são aquecidos sob uma lâmpada de calor por alguns minutos, o que faz com que as veias incham e facilita a inserção da agulha. Para manter o mouse estável durante a injeção, coloque-o em um contidor de plástico, deslizando a cauda através de um orifício especial na parte de trás.

Identificar a nave correta é imprescindível para injeções intravenosas bem sucedidas. Certifique-se de encontrar uma das duas veias caudais em ambos os lados da cauda; não a artéria na parte inferior da cauda.

Segurando o lado bevel da agulha para cima, insira-o na veia. Se a agulha estiver corretamente colocada, a injeção fará com que a veia mude de azul escuro para branco pálido na cor enquanto o agente se move através do vaso.

Após cada injeção, descarte a agulha em um recipiente de afiadas de risco biológico sem recapitular. Nunca reutilize a agulha, pois as pontas podem ficar em frangús e causar ferimentos ao rato.

Agora que você está familiarizado com métodos comuns de injeção, vamos olhar para algumas aplicações práticas de entrega de agentes experimentais.

Em muitos experimentos, os camundongos são infectados com um patógeno específico para estudar a progressão da doença, bem como interações hospedeiro-patógeno. Por exemplo, injeções subcutâneas de bactérias resistentes a antibióticos causam lesões cujo tamanho é uma leitura para a virulência do patógeno. Alternativamente, as injeções no footpad podem ser usadas para imagens vivas do recrutamento de células imunes para o local da infecção.

Modelos de camundongos também são úteis para o estudo da progressão do câncer e terapêutica. Para gerar esses modelos, as injeções podem ser usadas para induzir de forma rápida e eficiente crescimentos malignos em camundongos, tanto através da entrega de compostos cancerígenos quanto da implantação de células cancerosas em tecidos hospedeiros.

No entanto, a injeção nem sempre é necessária para a entrega do agente. A inoculação intranasal, por exemplo, pode ser usada para administrar um agente de interesse dos pulmões para imitar e estudar a progressão da doença respiratória. Outra rota, gavage, permite a administração direta do agente ao estômago para garantir uma dosagem precisa e precisa não alcançável através do tratamento à base de alimentos ou água.

Você acabou de ver a visão geral da JoVE sobre a introdução de agentes experimentais no rato. Neste vídeo, revisamos fatores a serem considerados ao escolher um agente experimental, ferramentas e estratégias para injeções de mouse, e algumas aplicações dessas técnicas críticas. Obrigado por assistir!

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Disclosures

Nenhum conflito de interesses declarado.

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