Overview
절제 배양은 생물 외부의 지속적인 발달을 위해 살아있는 세포 또는 조직이 태아에서 제거되는 기술입니다. 이 ex vivo 접근 은 연구원이 생체 내에서불가능 한 방법으로 개발 조직을 조작 하 고 관찰 할 수 있습니다. 일단 확립되면, 절제 된 문화는 유기 발생에 있는 유전자 그리고 신호 분자의 역할을 이해하기 위하여 빈번하게 이용됩니다.
이 비디오는 먼저 절제 문화의 기본 원칙을 소개하고 포유류 조직을 분리하고 성장시키는 프로토콜을 보여줍니다. 그 때 절제된 문화를 조작하는 일반적인 유전 및 분자 방법 토론될 것입니다. 마지막으로, 시청자들은 현재 장기 발달을 연구하기 위해 어떻게 식제 기술이 적용되고 있는지에 대해 알게 될 것입니다.
Procedure
각성 배양은 태아나 배아에서 조직과 장기를 모두 제거하거나 "심어"하고 몸에서 배양하거나"ex vivo"를배양하는 기술입니다. 이 방법은 기관및 조직 성장-유기신생에게 불린 프로세스의 직접적인 관측을 가능하게 해서 개발의 과정을 이해하는 것을 돕는 유일한 창을 제공합니다.
이 비디오는 절제 문화의 기본 원리를 검토하고, 절차의 주요 단계를 설명하고, 일반적인 조작에 대해 논의하고, 개발 연구에서이 기술의 특정 응용 프로그램을 제공합니다.
문화가 이별되는 방법을 설명하기 전에 이 기술의 이면에 있는 몇 가지 원리를 살펴보겠습니다.
절제 배양은 광범위한 유기체에서 다양한 배아 조직에 적용됩니다. 이 기술은 형태 발생으로 알려진 구조적 변화로 장기 발달연구에 이상적입니다. 또한, 조직은 개발에 미치는 영향을 결정하기 위해 실험 분자로 치료할 수 있습니다. 더욱이, 절제 문화가 유전자 발현과 형광 현미경을 바꾸기 위하여 분자 공구와 결합될 때, 세포 및 조직 분화의 질문을 해결하기 위한 강력한 공구가 됩니다.
다음으로, 포유류 조직의 배양 에 대한 프로토콜을 검토해 봅시다.
절차를 시작하기 위해, 배아는 안락사 임신 설치류에서 제거됩니다. 주변 막을 제거한 후 배아는 고립됩니다. 조직의 또는 관심 기관은 추출된 태아로부터 분리되고 성장을 위해 플레이트로 옮겨질 수 있습니다. 항생제를 함유한 미디어가 첨가되고 플레이트는 37°C에 설정된 인큐베이터에서 재배됩니다. 조직 이출은 이제 조작준비가 되었습니다.
절제 문화가 확립되면 여러 가지 유형의 조작을 수행할 수 있습니다.
예를 들어, 이식된 조직은 특정 발달 과정에 대한 관심 유전자의 역할을 시험하기 위해 유전적으로 조작될 수 있다. 이것은 전기장이 가까운 세포로 주입된 DNA를 몰기 위하여 이용되는 전기화 같이 기술을 사용하여 조직에 유전 물질을 소개하여 달성될 수 있습니다.
이식은 또한 자주 분자신호 분자 역할을 테스트 하는 데 사용 됩니다., 성장 인자 처럼, 유기 발생에서 재생. 체외에서 배양 된 조직은 화합물로 치료하는 것이 배양 매체에 추가하는 것만큼 간단하기 때문에 이러한 유형의 연구에 특히 유용합니다. 그러나, 실험 화합물에 담근 작은 구슬은 또한 화학 처리에 더 통제된 접근을 위해 조직으로 이식될 수 있습니다.
접근 방식에 관계없이, 절제 기술의 주요 장점은 실험 조작의 효과가 빛 또는 형광 현미경 을 사용하여 실시간으로 쉽게 시각화 할 수 있다는 것입니다.
이제 ex vivo 문화의 몇 가지 특정 응용 프로그램을 살펴보겠습니다.
첫째, 각종은 조직 발달이 직접 시각화될 수 있는 모델 시스템을 나타냅니다. 예를 들면, 이 연구원은 배아 마우스에서 발전하는 췌장을 제거하고 향상된 화상 진찰을 위한 유리 바닥 접시에 그것을 배양했습니다.
조직의 발달은 가벼운 현미경 검사법에 의해 관찰될 수 있습니다, 그러나 형광 마커를 표현하는 형질 조직의 사용은 tubule 신진 같이 발달 프로세스의 더욱 상세한 보기를 제공합니다. 이식된 조직은 또한 면역 염색을 실시할 수 있으며, 이는 연구원이 파란색과 녹색으로 표시된 인슐린 생성 세포와 같은 특정 세포 유형의 개발을 모니터링할 수 있게 합니다.
절제 문화의 또 다른 응용 프로그램은 특정 분자의 역할을 해독 하는 데 도움이, 성장 요인 처럼, 유기 발생에서.
여기서, E12.5 마우스 배아로부터 해부된 태아 폐 축출은 최대 48시간 동안 성장인자의 존재 또는 부재에서 성장되었다. 결과는 이 성장 인자가 태아 폐에 있는 기도 형성을 억제한다는 것을 표시합니다.
마지막으로, 초기 배아에서 의병은 배아 발생의 첫번째 단계 도중 유전자 발현을 통제하는 기계장치를 결정하기 위하여 이용될 수 있습니다.
이 연구원은 개구리 배아의 16 세포 단계에서 2개의 다른 세포 모형을 심었습니다: 등쪽 구조물을 형성하기 위하여 운명인 그, 및 복부 구조물에 기여할 것입니다 그. 상기 이절은 등등 조직에 특이적인 유전자의 발현 패턴을 특성화하기 위해 염색하기 전에 약 1일 동안 발전할 수 있었다.
이 유전자의 발현은 등쪽 영역에서의 각성에서만 관찰되었기 때문에, 유전자 발현 프로그램이 나중에 개발에서 발생하는 세포 세포 상호 작용에 의해 지시되는 것이 아니라 이러한 배아 세포에서 인코딩되었다는 결론을 내렸다.
우리는 지금 양식 문화를 검토하고 발달 연구 결과에서 어떻게 이용될 수 있는지 관찰했습니다. 이 기술은 동물 발달의 근간을 이수하는 분자 메커니즘에 대한 이해를 용이하게 하는 강력한 도구입니다. 시청해 주셔서 감사합니다!
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
이해 상충이 선언되지 않았습니다.
