الديدان الخيطية من خشب الصنوبر ، Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) Nickle ، هي واحدة من أكثر الأنواع الغازية تدميرا ، مما يتسبب في ذبول أشجار الصنوبر وموتها في نهاية المطاف. يعتقد أن هذه الديدان الخيطية المسببة للأمراض موطنها الولايات المتحدة الأمريكية ، ولكن تم نقلها إلى العديد من البلدان ، بما في ذلك الصين واليابان وكوريا الجنوبية والبرتغال. في الآونة الأخيرة ، تم الإبلاغ عنه أيضا في إسبانيا ، مما أدى إلى مقتل ملايين أشجار الصنوبر بخسائر اقتصادية فادحة وتهديد إنتاج الغابات والاستقرار البيئي1-5.
بمجرد إصابة شجرة الصنوبر المضيفة بالديدان الخيطية من خشب الصنوبر ، يتم نشر آلاف الملايين من النسل بسرعة داخل الجذع. هذا يسبب خلل نسيج الخشب ، مما يؤدي إلى الذبول وفي النهاية موت الشجرة المضيفة6. ومع ذلك ، لا توجد حاليا طريقة فعالة للسيطرة على هذا المرض. قد يلعب سلوك التزاوج دورا مهما في الخصوبة العالية لهذه الديدانالخيطية 7. لذلك قمنا بالتحقيق في سلوك التزاوج ل B. xylophilus في المختبر ، في محاولة لإيجاد طريقة فعالة لإزعاج تزاوجها وتقليل خصوبتها.
يهدف هذا البروتوكول إلى تقديم الطرق التفصيلية لكيفية الحصول على البالغين البكرية البالغين وكيفية مراقبة وتحليل سلوك التزاوج باستخدام مسجل فيديو ومجسم مجهر. يمكن أيضا استخدام هذا البروتوكول كمرجع للدراسات السلوكية للديدان الخيطية الأخرى.
الهدف العام لهذا الإجراء هو مراقبة سلوك التزاوج للديدان الخيطية من خشب الصنوبر ، Bursaphelenchus xylophilus. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في تطوير الدراسات النفسية للديدان الخيطية. يتعامل على وجه التحديد مع مراعاة سلوك التزاوج للديدان الخيطية من خشب الصنوبر.
الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن الحصول على البالغين البكر ، مما يجعل من السهل مراقبة سلوك التزاوج البالغين. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية فقط نحو الدراسة الأوسع للديدان الخيطية ، لأن لها سلوكيات دورات حياة مماثلة. لأن إثبات هذه الطريقة أمر بالغ الأهمية ، حيث أن اكتساب الديدان الخيطية البالغة البكر أمر صعب لأن قيود الديدان الخيطية التنموية تتطلب ممارسة وليس من السهل التمييز بدقة بين الذكور والإناث في المرحلة الأولى من الأحداث المبكرة.
لزراعة الديدان الخيطية من خشب الصنوبر ، قم أولا بإعداد أطباق أجار سكر العنب للبطاطس. لتلقيح لوحة ، قم بثقب قطعة من الحصيرة الفطرية بقطر 10 ملليمترات من حصيرة betritus senaria ، وضعها في منتصف لوحة المساعد الشخصي الشخصي الجديدة. استزراع الحصيرة الفطرية لمدة خمسة أيام عند 25 درجة مئوية في الظلام.
بعد خمسة أيام ، أضيفي الديدان الخيطية من خشب الصنوبر إلى طبق بتري المحضر وزرعهم لمدة ثلاثة أيام عند 25 درجة مئوية في الظلام. لعزل الديدان الخيطية عن الفطريات ، قم أولا بإعداد أداة تجميع. ضع أنبوبا