נמטודת עץ האורן, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) Nickle, היא אחד המינים הפולשים ההרסניים ביותר, הגורמים לנבילה ובסופו של דבר למוות של עצי אורן. מאמינים כי הנמטודה הפתוגנית הזו מקורה בארה"ב, אך היא הועברה למספר מדינות, כולל סין, יפן, דרום קוריאה ופורטוגל. לאחרונה דווח גם בספרד, הרג מיליוני עצי אורן בהפסדים כלכליים עצומים ואיים על ייצור היער והיציבות האקולוגית1-5.
ברגע שעץ אורן מארח נגוע בנמטודות עץ אורן, אלפי מיליוני צאצאים מתפשטים במהירות בתוך הגזע. זה גורם לתפקוד לקוי של הקסילם, וכתוצאה מכך לנבילה ובסופו של דבר למותו של העץ המארח6. עם זאת, אין כיום דרך יעילה לשלוט במחלה זו. התנהגות הזדווגות עשויה לשחק תפקיד חשוב בפוריות הגבוהה של נמטודה7 זו. לכן חקרנו את התנהגות ההזדווגות של B. xylophilus במעבדה, בניסיון למצוא דרך יעילה להפריע להזדווגות שלו ולהפחית את פוריותו.
פרוטוקול זה נועד להציג את השיטות המפורטות כיצד להשיג את הבוגרים הבתולים של B. xylophilus וכיצד להתבונן ולנתח את התנהגות ההזדווגות באמצעות מקליט וידאו וסטריאומיקרוסקופ. פרוטוקול זה יכול לשמש גם כהתייחסות למחקרים התנהגותיים של נמטודות אחרות.
המטרה הכוללת של הליך זה היא להתבונן בהתנהגות ההזדווגות של נמטודת עץ האורן, Bursaphelenchus xylophilus. שיטה זו יכולה לסייע בקידום מחקרים פסיכולוגיים של הנמטודה. הוא עוסק באופן ספציפי בשמירה על התנהגות ההזדווגות של נמטודת עץ האורן.
היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן להשיג בוגרים בתולים, מה שמקל בהרבה על התבוננות בהתנהגות הזדווגות של מבוגרים. ההשלכות של טכניקה זו משתרעות אך ורק לכיוון המחקר הרחב יותר של נמטודות, מכיוון שיש להן התנהגויות מחזורי חיים דומות. שכן הדגמת שיטה זו היא קריטית, מכיוון שרכישת נמטודות בוגרות בתוליות היא קשה מכיוון שמגבלות של נמטודות התפתחותיות דורשות תרגול ולא קל להבחין במדויק בין זכרים לנקבות בשלב מוקדם של צעירים.
כדי לגדל נמטודות מעץ אורן, הכינו תחילה צלחות אגר דקסטרוז תפוחי אדמה. כדי לחסן צלחת, אגרוף חתיכת מחצלת פטרייתית בקוטר 10 מילימטרים ממחצלת betritus senaria, והניח אותה באמצע צלחת PDA חדשה. תרבית את מחצלת הפטרייה במשך חמישה ימים בחום של 25 מעלות צלזיוס בחושך.
לאחר חמישה ימים, הוסיפו את נמטודות עץ האורן לצלחת הפטרי המוכנה ותרבו אותן במשך שלושה ימים בחום של 25 מעלות צלזיוס בחושך. כדי לבודד את הנמטודות מהפטרייה, הכינו תחילה כלי איסוף. הנח צינור גומי מהודק מתחת למשפך, והחזק את המשפך המוכן במתלה כדי להרכיב את מנגנון משפך ברמן.
לאחר מכן, הניחו שתי שכבות של נייר