De dennenematode, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner en Buhrer) Nickle, is een van de meest destructieve invasieve soorten, die het verwelken en uiteindelijk de dood van dennen veroorzaakt. Men neemt aan dat deze pathogene nematode inheems is in de VS, maar hij is getransporteerd naar verschillende landen, waaronder China, Japan, Zuid-Korea en Portugal. Onlangs is hij ook gemeld in Spanje, waarbij miljoenen dennen zijn omgekomen met enorme economische verliezen en een bedreiging voor de bosproductie en ecologische stabiliteit1-5.

Zodra een gastheerden is geïnfecteerd door dennenematoden, worden er snel duizenden miljoenen nakomelingen in de stam geproduceerd. Dit veroorzaakt disfunctie van het xyleem, wat resulteert in verwelking en uiteindelijk de dood van de gastheerboom6. Er is echter momenteel geen efficiënte manier om deze ziekte te bestrijden. Paringsgedrag kan een belangrijke rol spelen in de hoge vruchtbaarheid van deze nematode7. Daarom hebben we het paringsgedrag van B. xylophilus in het laboratorium onderzocht en geprobeerd een effectieve manier te vinden om zijn paring te verstoren en zijn vruchtbaarheid te verminderen.

Dit protocol is bedoeld om de gedetailleerde methoden te introduceren voor het verkrijgen van de maagdelijke volwassenen van B. xylophilus en om het paringsgedrag te observeren en te analyseren met behulp van een videorecorder en een stereomicroscoop. Dit protocol kan ook worden gebruikt als een referentie voor gedragsstudies van andere nematoden.

Het algemene doel van deze procedure is om het paringsgedrag van de dennehoutworm, Bursaphelenchus xylophilus, te observeren. Deze methode kan helpen bij het bevorderen van psychologische studies van de worm. Het gaat specifiek over het observeren van het paringsgedrag van de dennehoutworm.

Het grote voordeel van deze techniek is dat ongeslachtelijke volwassenen kunnen worden verkregen, wat het veel gemakkelijker maakt om het paringsgedrag van volwassenen te observeren. De implicaties van deze techniek zijn puur gericht op de bredere studie van nematoden, omdat ze vergelijkbare levenscyclusgedragingen hebben. De demonstratie van deze methode is cruciaal, aangezien het verkrijgen van ongeslachtelijke volwassen nematoden moeilijk is omdat de beperkingen van ontwikkelende nematoden oefening vereisen en het niet gemakkelijk is om mannetjes en vrouwtjes in de vroege eerste stadium-jongens nauwkeurig te onderscheiden.

Om dennehoutwormen te kweken, bereidt u eerst aardappel-dextrose-agarplaten voor. Om een plaat te inoculeren, prikt u een stuk schimmelmat met een diameter van 10 millimeter van een betritus senaria-mat, en plaatst u deze in het midden van een nieuwe PDA-plaat. Cultiveer de s