Nicień sosnowy, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner i Buhrer) Nickle, jest jednym z najbardziej destrukcyjnych gatunków inwazyjnych, powodującym więdnięcie i ostateczną śmierć sosen. Uważa się, że ten chorobotwórczy nicień pochodzi z USA, ale został przetransportowany do kilku krajów, w tym do Chin, Japonii, Korei Południowej i Portugalii. Ostatnio odnotowano go również w Hiszpanii, zabijając miliony sosen przy ogromnych stratach ekonomicznych i zagrażając produkcji leśnej i stabilności ekologicznej1-5.
Gdy sosna gospodarza zostanie zainfekowana przez nicienie sosnowe, tysiące milionów potomstwa jest szybko rozmnażanych w pniu. Powoduje to dysfunkcję ksylemu, powodującą więdnięcie i ostatecznie śmierć drzewa gospodarza6. Jednak obecnie nie ma skutecznego sposobu na kontrolowanie tej choroby. Zachowania godowe mogą odgrywać ważną rolę w wysokiej płodności tego nicienia7. W związku z tym zbadaliśmy zachowania godowe B. xylophilus w laboratorium, próbując znaleźć skuteczny sposób na zakłócenie jego krycia i zmniejszenie jego płodności.
Ten protokół ma na celu wprowadzenie szczegółowych metod pozyskiwania dziewiczych dorosłych osobników B. xylophilus oraz obserwacji i analizy zachowań godowych za pomocą magnetowidu i stereomikroskopu. Protokół ten może być również wykorzystany jako odniesienie do badań behawioralnych innych nicieni.
Ogólnym celem tej procedury jest obserwacja zachowań godowych nicienia sosnowego, Bursaphelenchus xylophilus. Ta metoda może pomóc w postępie badań psychologicznych nicieni. W szczególności zajmuje się obserwacją zachowań godowych nicienia sosnowego.
Główną zaletą tej techniki jest to, że można uzyskać dziewicze dorosłe osobniki, co znacznie ułatwia obserwację zachowań godowych dorosłych. Implikacje tej techniki rozciągają się wyłącznie w kierunku szerszego badania nicieni, ponieważ mają one podobne zachowania w cyklach życiowych. Demonstracja tej metody ma kluczowe znaczenie, ponieważ nabycie dziewiczych dorosłych nicieni jest trudne, ponieważ ograniczenia rozwojowe nicieni wymagają praktyki i nie jest łatwo dokładnie odróżnić samce od samic u młodych osobników we wczesnym pierwszym stadium.
Aby hodować nicienie sosnowe, najpierw przygotuj talerze agarowe z dekstrozą ziemniaczaną. Aby zaszczepić płytkę, należy przebić kawałek maty grzybowej o średnicy 10 milimetrów z maty betritus senaria i umieścić go na środku nowej płytki PDA. Hoduj matę grzybową przez pięć dni w temperaturze 25 stopni Celsjusza w ciemności.
Po pięciu dniach dodaj nicienie sosnowe do przygotowanej szalki Petriego