O nematóide da madeira do pinheiro, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner e Buhrer) Nickle, é uma das espécies invasoras mais destrutivas, causando o murchamento e eventual morte dos pinheiros. Acredita-se que esse nematóide patogênico seja nativo dos EUA, mas foi transportado para vários países, incluindo China, Japão, Coréia do Sul e Portugal. Recentemente, também foi relatado na Espanha, matando milhões de pinheiros com enormes perdas econômicas e ameaçando a produção florestal e a estabilidade ecológica1-5.
Uma vez que um pinheiro hospedeiro é infectado por nematóides da madeira de pinheiro, milhares de milhões de descendentes são propagados rapidamente dentro do tronco. Isso causa disfunção do xilema, resultando em murcha e, eventualmente, na morte da árvore hospedeira6. No entanto, atualmente não existe uma maneira eficiente de controlar esta doença. O comportamento de acasalamento pode desempenhar um papel importante na alta fecundidade desse nematóide7. Portanto, investigamos o comportamento de acasalamento de B. xylophilus em laboratório, tentando encontrar uma maneira eficaz de perturbar seu acasalamento e diminuir sua fecundidade.
Este protocolo destina-se a apresentar os métodos detalhados de como obter os adultos virgens de B. xylophilus e como observar e analisar o comportamento de acasalamento usando um gravador de vídeo e um estereomicroscópio. Este protocolo também pode ser usado como referência para estudos comportamentais de outros nematóides.
O objetivo geral deste procedimento é observar o comportamento de acasalamento do nematóide da madeira de pinheiro, Bursaphelenchus xylophilus. Este método pode ajudar a avançar os estudos psicológicos do nematóide. Ele lida especificamente com a observância do comportamento de acasalamento do nematóide da madeira do pinheiro.
A principal vantagem dessa técnica é que adultos virgens podem ser obtidos, o que torna muito mais fácil observar o comportamento de acasalamento dos adultos. As implicações dessa técnica se estendem puramente ao estudo mais amplo dos nematóides, porque eles têm comportamentos semelhantes aos ciclos de vida. Pois a demonstração deste método é crítica, pois a aquisição de nematóides adultos virgens é difícil porque as restrições de nematóides de desenvolvimento exigem prática e não é fácil distinguir com precisão machos de fêmeas em juvenis de primeiro estágio.
Para cultivar nematóides de madeira de pinheiro, primeiro prepare placas de ágar dextrose de batata. Para inocular uma placa, perfure um pedaço de tapete fúngico com um diâmetro de 10 milímetros de um tapete de betritus senaria e coloque-o no meio de uma nova placa de PDA. Cultive o tapete fúngico por cin