Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education Library
Organic Chemistry

This content is Free Access.

German
Durchführung von 1D Dünnschichtchromatographie
 

Durchführung von 1D Dünnschichtchromatographie

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

Dünnschichtchromatographie oder TLC, ist eine chromatographische Methode zum Trennen von Mischungen von nicht-flüchtigen Verbindungen, häufig in der organischen Chemie verwendet.

TLC erfolgt auf einem Teller Glas oder Kunststoff gesichert. Eine Baseline ist auf dem Teller zusammen mit Etiketten gekennzeichnet. Die Mischung untersucht und Referenz Verbindungen sind in einem geeigneten Lösungsmittel gelöst und in der Nähe von der Unterkante der TLC Platte in kleine Flecken angewendet. Die Platte befindet sich in einem Glas und einem Lösungsmittel (mobile Phase) trennt die Mischung basierend auf physikalischen Eigenschaften der einzelnen Komponenten.

Trotz der Tatsache, dass mehr Instrument-schwere Trennung Techniken mehr Auflösungsvermögen als TLC haben ist die Geschwindigkeit und niedrigen Kosten das macht TLC eine attraktive Technik für on-the-Fly Qualitative Analyse. Dieses Video veranschaulicht die Vorbereitung, den Betrieb und die Analyse der Dünnschichtchromatographie.

Chromatographische Techniken umfassen eine stationäre und mobile Phase. In TLC besteht die stationäre Phase aus einer dünnen Schicht des Materials an der Platte befestigt. Das Material ist eine polare Substanz, wie Silica-Gel. Die mobile Phase ist eine unpolare Flüssigkeit, die durch Kapillarwirkung die Adsorbens Schicht bewegt. Wie die mobile Phase sich die Platte bewegt, schleppt es entlang der Komponenten von jedem Fleck, die anschließend getrennt sind anhand der Polarität.

Verbindungen, die weniger polar verbringen mehr Zeit in der mobilen Phase, da es auf die Platte gezogen wird. Verbindungen, die mehr polar sind mehr in der stationären Phase angezogen und bewegt sich daher nicht auf die Platte so weit.

Die Trennung erfolgt in einem dritten Container. Diese können Gläser mit Deckeln oder Becher mit Alufolie abgedeckt werden. Verwenden Sie die kleinste Container zur Verfügung, der die TLC Platte um die Trennung zu beschleunigen beherbergen wird.

Die mobile Phase oder entwickelnden Lösungsmittel sollte so unpolaren wie möglich für eine gute Trennung. Gezeigt, hier ist eine Eluotropic-Serie für Silica-Gel, eine Liste der gemeinsamen Mobile Phasen steigender extrahieren macht.

Eine Reihe von mobilen Phasen kann gleichzeitig geprüft werden. Auf einen sauberen Teller vor Ort die gelöste Probe mehrmals, mindestens 2 cm auseinander. Wenden Sie genug mobilen Phase zu jedem Ort, um einen Kreis zu bilden ca. 1-2 cm im Durchmesser.

Markieren Sie die Entfernung, die die mobile Phase zurücklegt. Wenn die mobile Phase nicht polar genug ist, wird die Probe nah an der ursprünglichen Stelle bleiben. Wenn die mobile Phase zu polar ist, werden alle der Probe mit dem Lösungsmittel Front migriert. Eine entsprechende mobile Phase wird gut getrennte Ringe mit dem äußersten Ring ca. 50 % des Abstandes zum Lösungsmittel vorne zeigen.

Bei Bedarf können zwei mischbaren mobile Phasen in unterschiedlichen Anteilen, die gewünschten Eigenschaften zu erhalten gemischt werden. Hier war eine 1:1 Mischung aus Ethylacetat und Hexan zu polar, sondern eine 01:20 Mischung wurde entsprechend getrennt.

Mit der mobilen Phase ausgewählt können Sie zu Beginn der Entwicklung der Plattenrandes.

Um den Vorgang zu starten, schneiden Sie eine handelsübliche TLC Platte auf die gewünschte Größe. Wenn die Platte ein Glas Unterstützung hat, erhält es mit einem Glasschneider und sorgfältig brechen entlang der Linie.

Markieren Sie mit einem Bleistift eine Basislinie ca. 1 cm vom unteren Rand der Platte. Markieren Sie die Stelle, wo die Proben entlang der Linie entdeckt werden werden. Achten Sie darauf, dass die Flecken mit mindestens 1 cm vom Rand und 3 mm voneinander entfernt sind. Beschriften Sie sie entsprechend.

Feste Proben müssen in einem geeigneten Lösungsmittel gelöst werden. Gebräuchlichen Lösungsmitteln enthalten Hexanes, Ethylacetat oder Dichlormethan. Verwenden Sie die wenigsten polare Lösungsmittel, das die Probe auflösen wird.

Die Aufstellung der Probe/Lösungsmittel-Gemisches mit einem Glas Kapillare. Sanft berühren Sie die Spitze an die gewünschte Position auf der TLC Platte und sofort entfernen. Es ist wichtig, nicht die stationäre Phase stören.

Halten Sie den Ort so klein wie möglich, so dies zu einer besseren Trennung führt. Wenn mehr Probe erforderlich ist, können Flecken sukzessive an jedem Ort angewendet werden. Das Lösungsmittel zum Trocknen zwischen Anwendungen zu ermöglichen. Ein Luftstrom kann verwendet werden, um weniger flüchtigen Lösemitteln trocknen.

Die TLC Platte ist nun bereit, entwickelt werden. Legen Sie ein Stück Filterpapier in den Boden des Glases, der Dampfdruck zu erhöhen. Fügen Sie der mobilen Phase bis zu einer Tiefe, die nicht an die Grundlinie gelangt. Cap die Jar bei Nichtgebrauch, damit die Lösungsmitteldämpfe nicht entgehen.

Legen Sie die gefleckte TLC Platte vorsichtig in den Entwicklungsländern Glas. Sicherstellen Sie, dass die mobile Phase unterhalb der Grundlinie ist. Beobachten Sie den Fortschritt der Lösungsmittel Front – die Vorderkante der mobilen Phase – wie es die Platte schnell bewegen wird.

Lassen Sie die mobile Phase erreichen die obere Kante der Platte, nicht zu, wie Probe Bands startet durch Diffusion zu erweitern. Sobald das Lösungsmittel vorne oben nähert, entfernen Sie die Platte aus der dritten Kammer und markieren Sie Lösungsmittel vorne mit einem Bleistift, bevor das Lösungsmittel trocknet.

Wenn die Verbindungen nicht gefärbt sind, kann eine UV-Lampe verwendet werden, um die Flecken zu visualisieren. Die Verbindung blockiert die Hintergrundfluoreszenz der Platte. Stellen Sie die Lampe auf die Kurzwellen-Einstellung, und beleuchten Sie die Trockenplatte. Mit einem Bleistift skizzieren Sie keine Flecken sichtbar unter der Lampe. Mit einem Bleistift skizzieren Sie keine Flecken sichtbar unter der Lampe.

Eine andere mögliche Visualisierungstechnik ist mit Kaliumpermanganat, Oxidationsmittel. Mit einer Pinzette, Tauchen Sie die Platte in der Permanganat-Fleck.

Entfernen Sie und tupfen Sie entfernt überschüssige Lösung mit einem Papiertuch ab. Erhitzen Sie in einer Dampfhaube sorgfältig die Platte mit einer Heißluftpistole die Spots zu visualisieren. Benutzen Sie einen Bleistift, um irgendwelche Punkte zu markieren, die angezeigt werden.

Nachdem die Spots visualisiert haben, kann die Substanz von Interesse an Standards, verglichen werden, wie hier gezeigt. In diesem Beispiel ist das unbekannte 1,3-Diphenylpropynone, ein Baustein in der organischen Synthese. Durch den Vergleich der Band zu einem bekannten Standard und Benzoyl-Chlorid, einer der Ausgangsstoffe, kann das Produkt identifiziert werden.

Die Retardierung Faktor oder Rf, wird verwendet, um die unbekannte Verbindung zu identifizieren. R-f ist das Verhältnis des Abstands reist eine Verbindung einen TLC-Teller in der Ferne reist die mobile Phase. Der Faktor wird durch Messung der Entfernung von der Grundlinie auf den Punkt und dividiert durch den Abstand von der Grundlinie nach Lösungsmittel vorne bestimmt.

Rf einer bestimmten Verbindung ist abhängig von Bedingungen im Experiment, einschließlich Lösungsmittel Wahl, Stärke und Aktivität des Adsorbens, Temperatur und Sample-Größe verwendet. Darauf sollte geachtet werden, um diese Faktoren zwischen Experimenten konsistent zu halten.

Sie habe nur Jupiters Einführung in Dünnschichtchromatographie beobachtet. Sie sollten jetzt verstehen die zugrunde liegende Theorie der Gewaltenteilung, wie eine entsprechende mobile Phase für Ihr Experiment wählen und Gewusst wie: einrichten und bedienen einer TLC Platte. Danke fürs Zuschauen!

Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter