Medicine
A subscription to JoVE is required to view this content.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Pancreas duct infusie: een effectieve en selectieve methode van drug en virale levering
Chapters
Summary
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Pancreaskanaalinfusie is een belangrijke techniek die lineage tracing, genintroductie en cellijnspecifieke targeting mogelijk kan maken. Een pancreaskanaalinfusietechniek voor medicijn- en virale toediening aan pancreascellen wordt hier gepresenteerd.
Transcript
Het algemene doel van deze pancreaskanaalinfusieprocedure is om afstammingstracering, genintroductie en cellijnspecifieke targeting in de alvleesklier mogelijk te maken. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen over ziekten die de alvleesklier aantasten, waaronder chronische pancreatitis, diabetes en alvleesklierkanker. Plaats om te beginnen een verdoofde muis onder een ontleedmicroscoop, zodat zijn buik in het midden van het gezichtsveld wordt geplaatst.
Immobiliseer het dier met een chirurgische tape en breng vervolgens een oogheelkundige zalf aan op zijn ogen om te voorkomen dat ze drogen. Bedek vervolgens de buik van de muis met een dikke laag ontharingscrème. En veeg na ongeveer drie minuten de crème voorzichtig af met gaas gedrenkt in 70% ethanol om al het haar te verwijderen.
Veeg ten slotte de huid af met 70% ethanol, gevolgd door 10% povidonjodideoplossing om eventuele verontreinigingen te verwijderen en de huid te desinfecteren. Om de operatie te beginnen, creëert u met een scalpel een middellijn huidincisie die zich uitstrekt van het xiphoid-proces tot de navelstreng. Til vervolgens met adson-tang het buikvlies op en maak met een schaar een klein middellijngat.
Vouw de snede uit langs de middellijn van het peritoneum, zodat de lengte gelijk is aan de lengte van de huidincisie. Gebruik vervolgens stompe oprolmechanismen om de lever op te trekken en klem deze na het blootstellen van het gemeenschappelijke galkanaal met een gebogen bulldog vasculaire klem. Identificeer de twaalfvingerige darm en trek deze met de Arruga-tang er caudale uit om de papilla zichtbaar te maken als een witte vlek op het voorste oppervlak van het tweede deel van de twaalfvingerige darm.
Om het pancreaskanaal te identificeren, trekt u de twaalfvingerige darm caudaal terug en plaatst u vervolgens een 30-1/5 gauge naald tangentially op de twaalfvingerige darm en maakt u een punctie op de muur die direct tegenover de papilla staat. Om de oplossing te infuseren, introduceert u de katheter die is aangesloten op een infuuspomp door de gecreëerde duodenotomie en schuift u deze langs het kanaal totdat deze zichtbaar is in het vat, maar reikt niet verder dan een centimeter om te voorkomen dat kleine ductale zijrivieren worden omzeild. Immobiliseer de katheter door deze te klemmen met een tweede gebogen bulldog vasculaire klem.
Schakel vervolgens de pomp in om de infusie van 150 microliter van de oplossing in het kanaal te starten. Injecteer vervolgens ongeveer 1,5 milliliter zoutoplossing in het buikvlies van de muis om verlies van doordrenkt volume te voorkomen en bedek vervolgens de blootgestelde darm met een bevochtigd gaas om uitdroging te voorkomen. Zodra de infusie is voltooid, laat u de geïmmobiliseerde katheter los en verwijdert u deze met behulp van de bulldogklem voorzichtig uit het pancreaskanaal.
Laat vervolgens de klem los van het gemeenschappelijke galkanaal. Sluit het peritoneum en de huid door ze continu in een enkele laag te hechten en de eerste van de twee doses analgeticum toe te dienen, waarvan de tweede de volgende dag wordt gegeven. Breng de muis vervolgens terug naar een kooi onder een warmtelamp en voorzie het dier van voedsel en water ad libitum.
Observeer de muis totdat hij voldoende bewustzijn heeft herwonnen, gemanifesteerd in sternale ligfiets. Zeven dagen na de operatie, accijns van de geëuthanaseerde dierlijke alvleesklier evenals milt, lever, en twaalfvingerige darm dienen als controles. Dompel de hele geïsoleerde weefsels onder in een 4%-paraformaldehydeoplossing en fixeer ze 's nachts op vier graden Celsius.
Zodra de weefsels zijn bevestigd, cryo beschermen de monsters door ze te weken in een 30% sacharose oplossing op vier graden Celsius 's nachts. Na een nachtelijke cryobescherming, snap bevriezen van de monsters in vloeibare stikstof en met behulp van een microtome, snijd weefsel secties op zes micrometer. Bekijk ten slotte de secties onder een fluorescerende microscoop.
Hier worden microscopische beelden gepresenteerd van alvleeskliersecties die zeven dagen na een schijnoperatie van muizen zijn verwijderd en pancreaskanaalinfusie van AAV8 met het GFP-gen. Lever, milt en twaalfvingerige darm geïsoleerd van de muis doordrenkt met AAV8 vertoonden geen GFP-signaal, terwijl de alvleesklier een prominente GFP-expressie onthulde, wat de alvleesklierspecifieke toediening van het virus na infusie van pancreaskanalen bevestigde. Eenmaal onder de knie, kan deze techniek in 10 minuten worden uitgevoerd wanneer deze correct wordt uitgevoerd.
Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het erg belangrijk om zorgvuldige dissectie uit te voeren en een zo klein mogelijke duodenotomie te maken voor het inbrengen van de katheter. Na de ontwikkeling maakte de techniek de weg vrij voor onderzoekers die de alvleesklier bestudeerden om een aantal pathologieën te onderzoeken die het orgaan treffen, waaronder chronische pancreatitis, diabetes en alvleesklierkanker in zowel knaagdier- als grotere diermodellen. Na het bekijken van deze video moet u een zeer goed begrip hebben van hoe u zowel effectief als selectief het pancreaskanaal kunt infuseren.
Tags
Geneeskunde Alvleesklier pancreatitis alvleesklierkanker diabetes pancreaskanaal virale therapie afstammingstracering genintroductieRelated Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
