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अग्नाशय वाहिनी जलसेक एक महत्वपूर्ण तकनीक है कि वंश ट्रेसिंग, जीन परिचय, और सेल लाइन विशिष्ट लक्ष्यीकरण के लिए अनुमति दे सकते है । अग्नाशय की कोशिकाओं को दवा और वायरल वितरण के लिए एक अग्नाशय वाहिनी जलसेक तकनीक यहां प्रस्तुत की जाती है।
इस अग्नाशय वाहिनी जलसेक प्रक्रिया का समग्र लक्ष्य अग्न्याशय में वंश अनुरेखण, जीन परिचय, और सेल लाइन विशिष्ट लक्ष्यीकरण को सक्षम करना है। इस विधि से अग्न्याशय को प्रभावित करने वाली बीमारियों के बारे में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब देने में मदद मिल सकती है, जिसमें क्रोनिक अग्नाशयशोथ, मधुमेह और अग्नाशय का कैंसर शामिल है। शुरू करने के लिए, एक एनेस्थेटाइज्ड माउस को विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे रखें ताकि इसका पेट देखने के क्षेत्र के केंद्र में तैनात हो।
एक शल्य टेप के साथ जानवर को स्थिर करें और फिर उन्हें सूखने से रोकने के लिए अपनी आंखों पर एक नेत्र मरहम लागू करें। इसके बाद, माउस के पेट को हेयर रिमूवल क्रीम की मोटी परत से ढक दें। और लगभग तीन मिनट के बाद, धीरे से सभी बालों को हटाने के लिए 70% इथेनॉल में भिगोया धुंध के साथ क्रीम मिटा।
अंत में, त्वचा को 70% इथेनॉल से पोंछें, इसके बाद किसी भी संदूषक को हटाने और त्वचा को कीटाणुरहित करने के लिए 10% पोविडोन आयोडाइड समाधान के बाद। सर्जरी शुरू करने के लिए, एक स्केलपेल के साथ एक मिडलाइन त्वचा चीरा बनाएं जो xiphoid प्रक्रिया से अम्बिलिकस तक फैली हुई है। फिर एडसन संदंश का उपयोग कर, पेरिटोनम उठा और कैंची के साथ एक छोटे से मिडलाइन छेद बनाते हैं ।
पेरिटोनम के मिडलाइन के साथ कट का विस्तार करें ताकि इसकी लंबाई त्वचा के चीरे की लंबाई के बराबर हो। इसके बाद, जिगर को खींचने के लिए कुंद रिट्रैक्टर्स का उपयोग करें और आम पित्त वाहिनी को उजागर करने के बाद, इसे घुमावदार बुलडॉग वैस्कुलर क्लैंप के साथ दबाएं। डुओडेनम और अरुगा संदंश के साथ पहचानें, इसे डुओडेनम के दूसरे हिस्से की पूर्ववर्ती सतह पर एक सफेद स्थान के रूप में दिखाई देने वाले पैपिला को प्रदर्शित करने के लिए इसे बाहर निकालें।
अग्नाशय वाहिनी की पहचान करने के लिए, डुओडेनम कौडली को वापस लें, फिर डुओडेनम को 30-1/5 गेज सुई की स्थिति में रखें और अपनी दीवार पर एक पंचर बनाएं जो सीधे पैपिला के विपरीत है। समाधान को बढ़ावा देने के लिए, बनाए गए डुओडेनोटॉमी के माध्यम से एक जलसेक पंप से जुड़े कैथेटर को पेश करें और इसे वाहिनी के साथ स्लाइड करें जब तक कि यह पोत के भीतर दिखाई न दे, लेकिन मामूली डक्टल सहायक नदियों को दरकिनार करने से बचने के लिए एक सेंटीमीटर से आगे नहीं पहुंचता है। कैथेटर को दूसरे घुमावदार बुलडॉग वैस्कुलर क्लैंप के साथ क्लैंपिंग करके स्थिर करें।
फिर नली में समाधान के 150 माइक्रोलीटर के जलसेक शुरू करने के लिए पंप चालू करें। इसके बाद, संचार मात्रा के किसी भी नुकसान से बचने के लिए लगभग 1.5 मिलीलीटर खारा माउस के पेरिटोनम को इंजेक्ट करें और फिर उपयोग को रोकने के लिए एक नम धुंध के साथ उजागर आंत्र को कवर करें। एक बार जलसेक पूरा हो जाने के बाद, स्थिर कैथेटर को छोड़ दें और बुलडॉग क्लैंप का उपयोग करें, धीरे-धीरे इसे अग्नाशय की नली से हटा दें।
फिर आम पित्त वाहिनी से क्लैंप जारी करें। पेरिटोनम और त्वचा को लगातार एक परत में टांका लगाकर बंद करें और एनाल्जेसिक की दो खुराकों में से पहली को प्रशासित करें, जिनमें से दूसरा अगले दिन दिया जाएगा। फिर माउस को एक गर्मी दीपक के नीचे तैनात पिंजरे में वापस करें और जानवर को भोजन और पानी विज्ञापन लिबिटम प्रदान करें।
माउस का निरीक्षण करें जब तक कि यह पर्याप्त चेतना वापस नहीं ले ले ले। सर्जरी के सात दिन बाद, इच्छामृत्यु वाले पशु अग्न्याशय के साथ-साथ तिल्ली, यकृत और ग्रहणेरम से उत्पाद शुल्क नियंत्रण के रूप में सेवारत। पूरे अलग ऊतकों को 4% पैराफॉर्मल्डिहाइड समाधान में विसर्जित करें और उन्हें रात भर चार डिग्री सेल्सियस पर ठीक करें।
एक बार ऊतकों को ठीक कर दिया जाता है, क्रायो नमूनों को चार डिग्री सेल्सियस पर 30% सुक्रोज समाधान में भिगोकर रात भर बचाता है। एक रात क्रायो संरक्षण के बाद, स्नैप तरल नाइट्रोजन में नमूनों को फ्रीज करें और एक माइक्रोटॉम का उपयोग करके, छह माइक्रोमीटर पर ऊतक वर्गों में कटौती करें। अंत में, फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत अनुभागों की छवि।
यहां प्रस्तुत अग्न्याशय वर्गों की सूक्ष्म छवियां चूहों से सात दिन नकली सर्जरी और अग्नाशय वाहिनी AAV8 के जलसेक के बाद GFP जीन ले जाने के लिए उत्पादित कर रहे हैं । जिगर, तिल्ली, और AAV8 के साथ संचार माउस से अलग duodenum किसी भी GFP संकेत नहीं दिखा था, जबकि अग्न्याशय प्रमुख GFP अभिव्यक्ति का पता चला, अग्नाशय-अग्नाशय वाहिनी जलसेक के बाद वायरस के विशिष्ट वितरण की पुष्टि । एक बार महारत हासिल करने के बाद, इस तकनीक को ठीक से प्रदर्शन करने पर 10 मिनट में किया जा सकता है।
इस प्रक्रिया को करते समय, सावधानीपूर्वक विच्छेदन करना और कैथेटर की शुरुआत के लिए सबसे छोटा संभव डुओडेनोटॉमी करना बहुत महत्वपूर्ण है। इसके विकास के बाद, तकनीक ने अग्न्याशय का अध्ययन करने वाले शोधकर्ताओं के लिए कई विकृतियों की जांच करने का मार्ग प्रशस्त किया जो अंग को पीड़ित करते हैं, जिनमें क्रोनिक अग्नाशयशोथ, मधुमेह और कृंतक और बड़े पशु मॉडल दोनों में अग्नाशय के कैंसर शामिल हैं। इस वीडियो को देखने के बाद, आपको अग्नाशय की नली को प्रभावी और चुनिंदा दोनों रूप से कैसे बढ़ावा देना चाहिए।
