Infusion av bukspottskörteln: En effektiv och selektiv metod för läkemedels- och virusleverans

Det övergripande målet med denna bukspottskörteln kanal infusion förfarande är att möjliggöra härstamning spårning, gen introduktion och cel linje-specifika inriktning i bukspottkörteln. Denna metod kan hjälpa till att svara på viktiga frågor om sjukdomar som påverkar bukspottkörteln, inklusive kronisk bukspottkörtelinflammation, diabetes och bukspottskörtelcancer. Till att börja med, placera en bedövad mus under ett dissekerande mikroskop så att buken är placerad i mitten av synfältet.

Immobilisera djuret med ett kirurgiskt tejp och applicera sedan en oftalmisk salva på ögonen för att förhindra att de torkar. Täck sedan musens buk med ett tjockt lager hårborttagningskräm. Och efter ungefär tre minuter torka försiktigt av grädden med gasväv blöt i 70% etanol för att ta bort allt hår.

Torka slutligen huden med 70% etanol, följt av 10% povidone iodidlösning för att avlägsna eventuella föroreningar och desinficera huden. För att börja operationen, skapa med en skalpell ett midline hudsnitt som sträcker sig från xiphoid processen till navelsträngen. Använd sedan Adson tång, lyft peritoneum och gör med sax ett litet mittlinjehål.

Expandera snittet längs mitten av peritoneum så att dess längd är lika med längden på hudsnittet. Använd sedan trubbiga upprullningsdon för att dra upp levern och efter att ha exponerat den gemensamma gallgången, kläm fast den med en böjd bulldoggvaskulär klämma. Identifiera årondenumet och med Arruga tång, dra ut det kaudally för att visa papilla synlig som en vit fläck på den främre ytan av den andra delen av åronden.

För att identifiera bukspottskörteln, dra ut årondenumet kaudally och placera sedan en 30-1/5 gauge nål tangentiellt till årondenumet och gör en punktering på väggen som direkt mittemot papillan. För att ingjuta lösningen, introducera katetern ansluten till en infusionspump genom den skapade duodenotomin och skjut den längs kanalen tills den är synlig i kärlet, men når inte längre än en centimeter för att undvika att kringgå mindre kanalbifloder. Immobilisera katetern genom att spänna fast den med en andra böjd bulldog vaskulär klämma.

Slå sedan på pumpen för att initiera infusionen av 150 mikroliter av lösningen i kanalen. Därefter injicera till musens peritoneum cirka 1,5 milliliter saltlösning för att undvika förlust av infunderad volym och täck sedan den exponerade tarmen med en fuktad gasväv för att förhindra uttorkning. När infusionen är klar släpper du den immobiliserade katetern och använder bulldoggklämman, ta försiktigt bort den från bukspottskörtelkanalen.

Lossa sedan klämman från den gemensamma gallgången. Stäng peritoneum och huden genom att kontinuerligt sutulera dem i ett enda lager och administrera den första av de två doserna av smärtstillande medel, varav den andra kommer att ges följande dag. Sätt sedan tillbaka musen i en bur placerad under en värmelampa och ge djuret mat och vatten ad libitum.

Observera musen tills den har återfått tillräckligt medvetande manifesterat i sternal kumbency. Sju dagar efter operationen fungerade punktskatt från den avlivade djur bukspottkörteln samt mjälte, lever och duoden som fungerar som kontroller. Fördjupa hela isolerade vävnader i en 4%paraformaldehyd lösning och fixa dem vid fyra grader Celsius över natten.

När vävnaderna är fixerade skyddar cryo proverna genom att blötlägga dem i en 30%sackaroslösning vid fyra grader Celsius över natten. Efter ett kryoskydd över natten, knäpp upp proverna i flytande kväve och använd en mikrotom, skär vävnadssektioner vid sex mikrometer. Slutligen, avbilda avsnitten under ett fluorescerande mikroskop.

Presenteras här är mikroskopiska bilder av bukspottkörtelsektioner strukna från möss sju dagar efter sham kirurgi och bukspottskörteln kanal infusion av AAV8 bär GFP genen. Lever, mjälte och duoden isolerad från musen infunderad med AAV8 visade inte någon GFP-signal medan bukspottkörteln visade framträdande GFP uttryck, bekräftar bukspottkörtel-specifika leverans av viruset efter bukspottskörteln kanal infusion. När den har behärskats kan denna teknik göras på 10 minuter när den utförs korrekt.

När du utför denna procedur är det mycket viktigt att utföra noggrann dissekering och göra minsta möjliga duodenotomi för introduktion av katetern. Efter dess utveckling banade tekniken väg för forskare som studerar bukspottkörteln att undersöka ett antal patologier som drabbar organet, inklusive kronisk bukspottkörtelinflammation, diabetes och bukspottkörtelcancer i både gnagare och större djurmodeller. Efter att ha tittat på den här videon bör du ha en mycket god förståelse för hur du både effektivt och selektivt ingjuter bukspottskörtelkanalen.