세포를 수송하는화물 피킹 기계를 가지고 세포 외 물질 - 리간드 등, 미생물 영양분, 및 막 관통 단백질 -로 정보, 에너지 및 다른 목적 1,2 셀있다. 그것은 세포 항상성, 조직의 기능, 및 전체 세포 생존에 중요하다. 형광 융합 단백질의 세포 - 기반 표현은 신호 경로 (3)의 위치 파악 및 G 단백질 결합 수용체 (GPCR)와 같은 막 횡단 수용체의 내재화를 연구 할 수있는 강력한 방법이다.
직접 형광 검출 기술과 결합 된 해파리 빅토리아 (Aequorea victoria)로부터의 녹색 형광 단백질 (GFP)로 태그 된 융합 단백질의 발현은, 넓은 수용을 얻은 단백질 타겟팅 연구 4, 5, 6. GFP 기반 detecti에는 고정 아티팩트 (7)을 피하면서 살아있는 세포의 실시간 영상을 허용하는 장점이있다. 다목적 클로닝 벡터 일련 9는 다양한 세포 8에 GFP 단백질 융합체의 발현을 용이하도록 구성되어있다. 및 pEGFP-N1 벡터는 포유류 세포에서보다 밝은 형광 발현 야생형 GFP에서 최적화 된 개선 된 녹색 형광 단백질 (EGFP)를 코딩하는 널리 상용화 된 플라스미드 벡터이다. EGFP의 형광 신호가 포유 동물 세포에서 발현 관찰, 형광 현미경, 바람직하게는 공 촛점 현미경으로 488 nm에서 여기 및 507 nm에서의 방출과 함께 이루어져야한다.
세포 내 위치 파악 및 수용체의 리간드 - 매개 된 내재화를 모니터링 된 GPCR (10)의 신호 전달과 기능을 조사하기 위해 일반적인 기법 11>까지. 대부분의 경우에는 내재화 된 GPCR의 탈감작 (작용제의 존재에도 불구하고, 자극 반응의 감쇠) (12, 13)로 이끈다. 내재화 수용체 리소좀에 통합 저하하거나 수용체는 상기 실험에서 사용 된 세포주의 특성에 따라 다시 세포 표면에 재활용 될 수 수있다.
고나 도트로 핀 방출 호르몬 수용체 (GnRHRs)는 GPCR 패밀리에 속하고, 세포 외 아미노 말단 세포 내 -COOH 단자 전형적인 GPCR 단백질 구조를 가지고 있고, 일곱 막 횡단 (TM)는 14 도메인들. (Sepiella 자포니카에서 GnRHR 유전자) 재조합 플라스미드 Sj에 GnRHR-EGFP의 형질 감염 및 (HEK293 세포에서 발현) EGFP 태깅 에스 GnRHR 공 초점 현미경의 검출은 기존에보고 된교활한 및 GFP 형광은 막 횡단 단백질 제이션 분석법 15 기자로 설치되었다. 이제, S. 자포니카 성선 자극 호르몬 방출 호르몬 (GnRH에 Sj에)에 의해 활성화 Sj에 GnRHR의 내재화는 공 촛점 현미경으로 시간 및 용량 - 의존적 방식으로 입증되었다.