투석: 확산 기반 분리

생화학 적 샘플은 일반적으로 다운스트림 처리 및 분석을 방해 할 수있는 높은 완충농도를 갖는다. 투석은 확산에 기초하여 분자를 분리하는 데 사용되는 일반적, 저렴한 기술입니다. 이 방법은 크기에 따라 특정 성분의 움직임을 허용하는 반 투과성 멤브레인을 사용합니다. 이 비디오는 투석의 개념, 일반적인 절차 및 생화학에 대한 사용의 일부를 보여줍니다.

투석의 가장 중요한 측면은 분자량 컷오프를 부과하는 모공이 있는 반 투과성 멤브레인으로 특정 크기 미만의 분자가 통과할 수 있도록 합니다. 예를 들어, 10k 멤브레인은 일반적으로 10킬로달톤보다 큰 분자를 유지합니다. 그러나, 분자량 차단은 이산 또는 정확한 경계가 아닙니다. 멤브레인은 전형적으로 광범위한 기공 크기를 포함하므로 컷오프 근처의 분자의 작은 분수는 손실될 수 있습니다.

분자량 컷오프는 구형 단백질을 사용하여 정의되기 때문에, DNA 또는 RNA 같이 유사한 질량의 선형 분자는, 통해 미끄러질 수 있습니다. 멤브레인은 전형적으로 원하는 분자의 분자량의 1/1을 선택한다.

절차를 수행하기 위해 샘플은 멤브레인에 배치되며, 이는 투석이라고 하는 대량의 용액에 차례로 추가됩니다. 시간이 지남에 따라, 더 작은 분자는 샘플과 투석 사이 막을 통해 자유롭게 확산 될 것 이다, 더 큰 생체 분자 내에서 개최 하는 동안. 투석은 느린 과정입니다. 하룻밤 동안 또는 며칠 동안 실행되도록 허용하는 것이 일반적입니다.

투석물이 순수한 물인 경우, 전체 완충 농도가 감소하며, 탈염처리로 알려져 있습니다. 솔루션에 다른 작은 파티클이 포함되어 있으면 일부는 샘플로 이동하여 버퍼 교환으로 이어집니다. 투석은 평형 과정이기 때문에 투석은 소분자를 더 이상 대체하기 위해 여러 번 새로 고칠 수 있습니다. 프로세스가 완료되면 추가 처리를 위해 샘플을 다시 수집합니다.

투석의 기초를 보았으니 일반적인 절차를 살펴보겠습니다.

절차를 시작하기 전에 멤브레인은 투석에 미리 담가됩니다. 이렇게 하면 사용하기 쉽고 방부제를 제거합니다. 일단 준비가 되면, 샘플은 일반적으로 주사기와 함께 수집되고 투석 용기에 추가됩니다. 이것은 맨손으로 튜브를 하거나 카세트 내에 포함될 수 있습니다. 초과 공기는 멤브레인으로 샘플의 표면적을 최대화하기 위해 투석 설정에서 제거됩니다. 그런 다음 확산을 최대화하기 위해 교반과 함께 투석에 설치됩니다. 교반을 억제하지 않도록 부동해야합니다.

투석은 시료와 투석 사이의 평형에 도달하면 관련 간격으로 변경됩니다. 마지막 변경 후, 반응은 일반적으로 하룻밤 실행 남아. 충분한 기간 이후에 버퍼가 없거나 교환된 샘플이 카세트에서 제거됩니다. 일단 수집되면, 실험의 특성에 따라 샘플을 분석하거나 추가로 처리할 수 있다.

이제 우리는 일반적인 투석 절차를 보았으니, 이 기술이 생화학에서 사용되는 방법 중 일부를 살펴보겠습니다.

밀도 그라데이션은 복잡한 생물학적 샘플을 분리하는 일반적인 방법입니다. 이 개념은 작은 입자, 일반적으로 자당 또는 염화물 이온에 분포에 의존한다. 완료되면 수집된 샘플을 처리하기 전에 이러한 시약을 제거해야 합니다. 투석은 향후 분석을 위해 정제된 샘플을 활용할 수 있게 합니다.

특정 단백질은 세포의 지질 이중층 내에서 발견되며, 일반적으로 리포솜으로 알려진 구형 지질 소포로 산재하여 연구됩니다. 단백질과 지질은 먼저 세제로 추출됩니다. 투석은 천천히 세제를 제거하기 위해 사용될 수 있으며, 프로테오올리포좀을 형성한다.

정화 후 일부 단백질은 잘못 접히거나 변성되어 기능저하를 초래합니다. 구조에 있는 이 변경을 일으키는 원인이 되는 화합물은 투석으로 제거될 수 있고, 기능성 점막의 재구성으로 이끌어 냅니다.

당신은 투석에 조브의 비디오를 보았다. 이제 이 확산 기반 방법, 간단한 실험 절차 및 이 기술의 사용을 이해해야 합니다.

시청해 주셔서 감사합니다!