Overview
표면 플라스몬 공명 (SPR)은 분자 친화성, 운동성, 특이성 및 생체 분자의 농도를 평가하기 위해 라벨이없는 바이오 센서 뒤에 근본적인 광학 현상입니다. SPR에서는, 생체 분자 상호 작용은 프리즘에 금속의 얇은 층으로 만든 생체 센서에서 생깁니다. 생체 분자의 실시간 상호 작용은 금속의 밑면에 반사되는 빛의 변화를 측정하여 모니터링할 수 있습니다.
이 비디오는 SPR의 기본 개념과 생체 분자 상호 작용을 분석하고 시각화하는 데 사용되는 방법을 설명합니다. 다음은 SPR을 사용하여 바인딩 속도를 조사하기 위한 샘플 준비 및 실험 프로토콜이 뒤따릅니다. 응용 분야 섹션에서는 SPR 이미징, 현지화된 SPR 및 퀀텀닷 강화 SPR을 탐구합니다.
표면 플라스몬 공명, 또는 SPR은 생체 분자의 결합 및 흡착 상호 작용을 평가하기위한 특정 라벨이없는 바이오 센서 뒤에 근본적인 현상입니다. ELISA와 같은 라벨링이 필요한 바인딩 된 소사는 시간이 많이 소요되는 과정이 될 수 있으며, 아닐리바이트의 기능을 변경할 수 있습니다. SPR에서는 프리즘의 한 면에 얇은 금속 층으로 만들어진 특수 센서에서 생체 분자 상호 작용이 발생합니다. SPR 계측기는 금속 의 밑면에서 반사되는 빛의 변화를 모니터링하여 라벨을 사용하지 않고 실시간으로 이러한 상호 작용을 시각화합니다. 이 비디오는 SPR의 원리, SPR 화상 진찰을 위한 일반적인 절차 및 생화학에 있는 몇몇 응용을 소개할 것입니다.
SPR 센서는 일반적으로 프리즘의 얼굴 꼭대기에 있는 고귀한 금속의 얇은 층으로 만들어집니다. 센서에서 판독값을 취하려면 프리즘-금속 인터페이스에서 빛이 광검출기로 반사됩니다. 반사된 광은 "표면 플라스몬 공명 각도"로 알려진 금속 표면의 전자 적 특성과 관련된 특정 각도를 제외하고 고강도를 갖는다.
분자가 표면에 결합함에 따라 금속의 전자 적 특성이 변경되어 각도가 조정됩니다. 새로운 단백질이 부착되면 복합체를 형성하면 각도가 더 바뀝을 것입니다. SPR 각도에서 상대적 변화를 측정함으로써 이러한 상호 작용을 실시간으로 모니터링할 수 있습니다.
"L"SPR이라는 또 다른 기술은 금속 나노 입자를 센서 표면으로 사용합니다. SPR 각도에 영향을 주는 특성은 각 나노입자에 매우 국한되어 감도 및 신호 해상도를 향상시킵니다.
표준 SPR과의 결합 상호 작용을 조사할 때 센서는 일반적으로 계측기의 유동 셀 바닥이되는 플랫폼에 장착됩니다. 관심있는 생체 분자는 완충액에 의해 유동 세포를 통해 전달됩니다. 센서 표면은 금속에 대한 높은 친화력을 가진 기판으로 먼저 코팅되는 경우가 많습니다. 이를 통해 관심 있는 연산에 결합되는 상당한 양의 리간드가 센서에 고정되어 시술 중에 리간드가 해리될 가능성을 줄입니다.
리간드가 센서에 고정되면, 딜리바이트는 버퍼의 센서 위로 흐르게 된다. 분석이 리간드에 결합됨에 따라 시간이 지남에 따라 SPR 각도의 변화를 모니터링함으로써 바인딩 속도 및 기타 운동 정보를 계산할 수 있습니다.
반사도 데이터는 반사된 빛을 CCD 검출기로 지시하여 SPR 이미징 또는 SPRi에도 사용될 수 있습니다. 이것은 전체 센서 표면의 고대비 고해상도 이미지를 생성합니다. SPR 및 관련 기술을 사용하여 분자 선호도, 운동, 특이성 및 농도에 대한 질문에 답할 수 있습니다.
이제 SPR 실험에서 측정되는 측정내용을 이해하게 되었으므로 바인딩 속도를 조사하는 절차를 살펴보겠습니다.
프로시저를 시작하기 전에 실행 및 샘플 버퍼를 준비해야 합니다. 실행 중인 버퍼는 리간드를 센서에 증착하는 데 사용되며 샘플 버퍼는 소행성을 증착하는 데 사용됩니다. 센서 칩은 조심스럽게 세척되어 칼집에 로드됩니다. 그런 다음 장치는 계측기로 배치되어 흐름 셀의 바닥이됩니다. 계측기 소프트웨어는 실험 및 후속 분석을 위해 설정됩니다. 필요한 경우 센서 표면은 리간드를 캡처하기 위해 기판으로 준비됩니다. 리간드는 실행 중인 버퍼의 센서 표면 위로 흐르며 센서 표면의 기판에 의해 포획됩니다.
이어서, 샘플 버퍼내의 단량은 유동 셀을 통해 실행되며, 여기서 고정 된 리간드에 선택적으로 결합한다. 반사율의 변화는 플롯및 조사 된 반응에 대한 속도 상수 및 기타 반응 역학 데이터를 결정하기 위해 컨트롤에 비해 비교된다.
이제 SPR 실험이 어떻게 수행되는지 이해되었으므로 생화학에서 SPR의 몇 가지 다른 응용 프로그램을 살펴보겠습니다.
여기서, SPR 화상 진찰은 센서에 11개의 수용체의 배열을 가진 단백질을 평가하기 위하여 이용되었습니다. 반사도 대 시간 및 수용체 농도의 3D 그래프는 각 단백질에 대한 반사도 데이터로부터 제조되었다. 이러한 "프로파일"은 각 단백질에 특징이며, 따라서 단백질 식별을 위해 나중에 사용될 수 있습니다.
이 실험에서는 맞춤형 LSPR 센서를 사용하여 세포 분비물연구가 이루어졌습니다. 센서는 또한 SPRi 및 형광 현미경 검사법과 호환되었습니다. 센서에 셀을 증착하면 나노입자 어레이와의 세포 분비물의 상호 작용이 높은 공간 해상도로 측정될 수 있습니다.
여기서, 양자점, 나노스케일 반도체의 사용을, Aalyte와 혼합된 SPR 신호 향상 제로서 의 사용이 조사되었다. 이러한 향상된 "나노-SPRi" 방법은 표준 SPRi 및 ELISA 방법에 의한 애사와 비교하였다. 나노-SPRi 방법은 ELISA 방법보다 시간이 덜 소요되는 동시에 검출의 감도 및 한계를 현저히 향상했다.
당신은 방금 표면 플라스몬 공명에 조브의 비디오를 보았다. 이 현상은 라벨을 사용하지 않고 생체 분자 상호 작용을 모니터링하고 이미지화하는 데 사용됩니다. 이 비디오는 SPR 실험 수행을 위한 일반적인 프로토콜인 SPR의 원리와 생화학에서 SPR의 몇 가지 응용 을 소개했습니다.
시청해 주셔서 감사합니다!
Procedure
표면 플라스몬 공명 (SPR)은 분자 친화성, 운동성, 특이성 및 생체 분자의 농도를 평가하기 위해 라벨이없는 바이오 센서 뒤에 근본적인 광학 현상입니다. SPR에서는, 생체 분자 상호 작용은 프리즘에 금속의 얇은 층으로 만든 생체 센서에서 생깁니다. 생체 분자의 실시간 상호 작용은 금속의 밑면에 반사되는 빛의 변화를 측정하여 모니터링할 수 있습니다.
이 비디오는 SPR의 기본 개념과 생체 분자 상호 작용을 분석하고 시각화하는 데 사용되는 방법을 설명합니다. 다음은 SPR을 사용하여 바인딩 속도를 조사하기 위한 샘플 준비 및 실험 프로토콜이 뒤따릅니다. 응용 분야 섹션에서는 SPR 이미징, 현지화된 SPR 및 퀀텀닷 강화 SPR을 탐구합니다.
표면 플라스몬 공명, 또는 SPR은 생체 분자의 결합 및 흡착 상호 작용을 평가하기위한 특정 라벨이없는 바이오 센서 뒤에 근본적인 현상입니다. ELISA와 같은 라벨링이 필요한 바인딩 된 소사는 시간이 많이 소요되는 과정이 될 수 있으며, 아닐리바이트의 기능을 변경할 수 있습니다. SPR에서는 프리즘의 한 면에 얇은 금속 층으로 만들어진 특수 센서에서 생체 분자 상호 작용이 발생합니다. SPR 계측기는 금속 의 밑면에서 반사되는 빛의 변화를 모니터링하여 라벨을 사용하지 않고 실시간으로 이러한 상호 작용을 시각화합니다. 이 비디오는 SPR의 원리, SPR 화상 진찰을 위한 일반적인 절차 및 생화학에 있는 몇몇 응용을 소개할 것입니다.
SPR 센서는 일반적으로 프리즘의 얼굴 꼭대기에 있는 고귀한 금속의 얇은 층으로 만들어집니다. 센서에서 판독값을 취하려면 프리즘-금속 인터페이스에서 빛이 광검출기로 반사됩니다. 반사된 광은 "표면 플라스몬 공명 각도"로 알려진 금속 표면의 전자 적 특성과 관련된 특정 각도를 제외하고 고강도를 갖는다.
분자가 표면에 결합함에 따라 금속의 전자 적 특성이 변경되어 각도가 조정됩니다. 새로운 단백질이 부착되면 복합체를 형성하면 각도가 더 바뀝을 것입니다. SPR 각도에서 상대적 변화를 측정함으로써 이러한 상호 작용을 실시간으로 모니터링할 수 있습니다.
"L"SPR이라는 또 다른 기술은 금속 나노 입자를 센서 표면으로 사용합니다. SPR 각도에 영향을 주는 특성은 각 나노입자에 매우 국한되어 감도 및 신호 해상도를 향상시킵니다.
표준 SPR과의 결합 상호 작용을 조사할 때 센서는 일반적으로 계측기의 유동 셀 바닥이되는 플랫폼에 장착됩니다. 관심있는 생체 분자는 완충액에 의해 유동 세포를 통해 전달됩니다. 센서 표면은 금속에 대한 높은 친화력을 가진 기판으로 먼저 코팅되는 경우가 많습니다. 이를 통해 관심 있는 연산에 결합되는 상당한 양의 리간드가 센서에 고정되어 시술 중에 리간드가 해리될 가능성을 줄입니다.
리간드가 센서에 고정되면, 딜리바이트는 버퍼의 센서 위로 흐르게 된다. 분석이 리간드에 결합됨에 따라 시간이 지남에 따라 SPR 각도의 변화를 모니터링함으로써 바인딩 속도 및 기타 운동 정보를 계산할 수 있습니다.
반사도 데이터는 반사된 빛을 CCD 검출기로 지시하여 SPR 이미징 또는 SPRi에도 사용될 수 있습니다. 이것은 전체 센서 표면의 고대비 고해상도 이미지를 생성합니다. SPR 및 관련 기술을 사용하여 분자 선호도, 운동, 특이성 및 농도에 대한 질문에 답할 수 있습니다.
이제 SPR 실험에서 측정되는 측정내용을 이해하게 되었으므로 바인딩 속도를 조사하는 절차를 살펴보겠습니다.
프로시저를 시작하기 전에 실행 및 샘플 버퍼를 준비해야 합니다. 실행 중인 버퍼는 리간드를 센서에 증착하는 데 사용되며 샘플 버퍼는 소행성을 증착하는 데 사용됩니다. 센서 칩은 조심스럽게 세척되어 칼집에 로드됩니다. 그런 다음 장치는 계측기로 배치되어 흐름 셀의 바닥이됩니다. 계측기 소프트웨어는 실험 및 후속 분석을 위해 설정됩니다. 필요한 경우 센서 표면은 리간드를 캡처하기 위해 기판으로 준비됩니다. 리간드는 실행 중인 버퍼의 센서 표면 위로 흐르며 센서 표면의 기판에 의해 포획됩니다.
이어서, 샘플 버퍼내의 단량은 유동 셀을 통해 실행되며, 여기서 고정 된 리간드에 선택적으로 결합한다. 반사율의 변화는 플롯및 조사 된 반응에 대한 속도 상수 및 기타 반응 역학 데이터를 결정하기 위해 컨트롤에 비해 비교된다.
이제 SPR 실험이 어떻게 수행되는지 이해되었으므로 생화학에서 SPR의 몇 가지 다른 응용 프로그램을 살펴보겠습니다.
여기서, SPR 화상 진찰은 센서에 11개의 수용체의 배열을 가진 단백질을 평가하기 위하여 이용되었습니다. 반사도 대 시간 및 수용체 농도의 3D 그래프는 각 단백질에 대한 반사도 데이터로부터 제조되었다. 이러한 "프로파일"은 각 단백질에 특징이며, 따라서 단백질 식별을 위해 나중에 사용될 수 있습니다.
이 실험에서는 맞춤형 LSPR 센서를 사용하여 세포 분비물연구가 이루어졌습니다. 센서는 또한 SPRi 및 형광 현미경 검사법과 호환되었습니다. 센서에 셀을 증착하면 나노입자 어레이와의 세포 분비물의 상호 작용이 높은 공간 해상도로 측정될 수 있습니다.
여기서, 양자점, 나노스케일 반도체의 사용을, Aalyte와 혼합된 SPR 신호 향상 제로서 의 사용이 조사되었다. 이러한 향상된 "나노-SPRi" 방법은 표준 SPRi 및 ELISA 방법에 의한 애사와 비교하였다. 나노-SPRi 방법은 ELISA 방법보다 시간이 덜 소요되는 동시에 검출의 감도 및 한계를 현저히 향상했다.
당신은 방금 표면 플라스몬 공명에 조브의 비디오를 보았다. 이 현상은 라벨을 사용하지 않고 생체 분자 상호 작용을 모니터링하고 이미지화하는 데 사용됩니다. 이 비디오는 SPR 실험 수행을 위한 일반적인 프로토콜인 SPR의 원리와 생화학에서 SPR의 몇 가지 응용 을 소개했습니다.
시청해 주셔서 감사합니다!
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Disclosures
이해 상충이 선언되지 않았습니다.
