Medicine
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成人ラットにおける脊髄横片切と非対称行動評価
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ここでは、成人ラットにおける9番目の胸部レベルで信頼性の高い脊髄横片切り(HX)を産生するための外科的処置と、そのような一方的な傷害後の非対称的な欠損を検出するために設計された神経行動評価について説明する。
Transcript
このプロトコルは、ヒトにおけるブラウン・セカール症候群を模倣する脊髄横半片の信頼性の高い動物モデルと、非対称行動の欠陥を評価するための新しい複合行動尺度を提供する。このマウスの半離層モデルは、ヒトのブラウン・スクアル症候群で起こる神経障害の理解をさらに深めることができる。あなたの言及された評価とは異なり、私たちの新しい組み合わせた行動スケールは、非対称、機関車および実験室内の赤字の評価を必要とする任意の金型に適用することができる。
これを用いて、一貫した自然なヘミセクションモデルは、基礎研究と翻訳研究の間の実験結果の比較を容易にすることができる。このモデルで一貫した結果を使用すると、初心者にとっては難しい場合があります。重要なステップは、損傷を誘発するためのガイダンスとして、正中線に針を垂直に配置することです。
このビデオを見た後、あなたは外科的処置と行動手順の両方を実行する方法をよく理解しているはずです。処置の日に、70%エタノールで外科テーブルをきれいにし、テーブルの上に温め込まれた暖房パッドを置く。手術領域を無菌の外科用ドレープで覆った後、麻酔下のラットのつまみへの応答の欠如を確認する。
角膜乾燥を防ぐために動物の目に軟膏を塗布し、胸椎の上に髪を剃ります。次いで、ヨウ素系とエタノールスクラブを3回交互に使用して、露出した皮膚を洗浄します。動物の準備ができたら、13番目の肋骨を見つけ、肋骨を後回しにしてT-13椎骨との関係を特定します。
T-9椎骨を識別するためにカウントし、数15のメスの刃を使用して、8〜11番目の椎体の脊椎棘プロセスにわたって3〜4センチメートルの中線皮膚切開を行います。ラットを手術用顕微鏡の下に移動し、両側のT-9およびT-10椎骨の面に向かって脊髄の筋肉を棘プロセスから横方向に解剖し、分離する。変更された安定化ホルダーで背骨を無効にし、側面椎骨の両側にスリットを作り、露出した横方向プロセスファセットの下でホルダーのステンレス製の腕をスライドさせます。
ネジを締めてホルダーを固定し、分度器を使用してT-8~11椎体ラミネアと棘プロセスを露出させます。回転体を使用して、T-9棘プロセスを切り取り、ラミナの小さな部分を取り除き、正中線とラミネの右側部分全体をできるだけ横に取り除きます。次に、ラミナの下にロンゲルをそっと挿入し、一度に1つの小さな骨片を切り取り、必要な部分のラミネクトミーが完了するまで切り取ります。
次に、脊髄の背骨の正中線を特定し、30ゲージの針を正線を通って垂直に脊髄に挿入し、脊椎管の腹壁まで、ベベルを右に向けます。滅菌ゲルフォームの小片で出血を停止し、針トラックの正中線を通して虹色のマイクロ手術ハサミのペアの1つの先端を挿入し、右のヘミコードの側面に沿ってもう一方の先端を挿入して、右のヘミコードを完全にカットします。ナイフと同じ針の横端を使用して、病変隙を切断して完全な右のヘミセクションを確認します。
そして、正しいヘミセクションの完全性を検証するために、椎骨管の底を視覚化する。セメント混合物を使用して、スポンジに架かる細い橋を構築し、T-8とT-10の棘プロセスを構築します。次いで、4/0シルク糸で筋肉と皮膚層を別々に縫合し、0.9%無菌生理食塩水を皮下に注入して水和を維持する。
最初の1週間は毎日2〜3回、次の週に1〜2回、自発的な膀胱空隙が戻るまで尿膀胱を押す。処置後の適切な実験時点で、成体ラットをオープンフィールド実験に入れ、動物の移動を4分間調べる。この表を使用して、動作カテゴリごとに yes''に 1、no'に 0 の値を割り当て、合計値を合計して最終的な片側ヘミセクションステップスコア 0~8 を指定します。
ゲートカップリング解析では、狭い滑走路装置上を歩いている実験動物を記録し、各カップリングカテゴリに対して、通常の'および/または不器用'の場合はno'1のスコア0を割り当てます。接触配置評価では、動物を垂直位置に保持し、後肢の両方が配置応答に使用できるようにし、後肢1本の後肢の後ろ面を表面の端に向かって軽く前方にブラッシングします。表面に足の配置を観察し、配置のための0のスコアを配置する後肢の接触を割り当てる'と配置のための1'グリッドウォーキング評価のために、3cmの正方形の開口部を持つ高い36×38センチメートルのプラスチックコーティングされた金網グリッドにラットを置き、ビデオ録画ラットは、各肢の足の誤りの数を定量化できるように30ステップのプラットフォームを横切って自由に歩行します。
傷害震源での断面のアミノ蛍光染色は、右のヘミコードの完全な損失を示す。そして、左の脊索の保存は、怪我に反します。個々のゲート評価測定のスコアは個別に分析することも、ヘミセクションスコアの後に複合複合複合的な動作に組み合わせることもできます。
傷害後の最初の3日間で、ラットはステップする能力を失い、ステップのような動きは怪我の後7 10日でイプシリソン側に再び現れ始める。そして、ほとんどのステップは後ろ足です。T-9半離切後28日までに、ラットは事実上正常な調整で足底ステップを踏むことができる。
対照的に、逆症の後肢は、傷害後の最初の5日以内に一方的な半離数スコアが低下し、10日目までにベースラインに戻り、怪我後にベースラインに戻ることで、中断が少ない。全ゲートカップリング試験では、ヘミセクション後の協調の安定性と適応性の両方が、傷害後の最初の5日間で著しく低下する。イピシテラショナル後肢の接触配置およびグリッドウォーキングも影響を受け、通常は動物が足底ステップを踏み始めると回復する。
クリーンカットの怪我を生じるのは難しい場合があります。途中に針を置くことは、組織の完全な分離を保証するための有用なガイドラインであり得る。
Tags
医学、問題157、脊髄損傷、ヘミセクション、ラット、ブラウン・セカール症候群、行動評価、非対称神経学的性能Related Videos
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