A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Immunstimulerende middel evaluering: Lymfoide væv udvinding og injektion rute-afhængige dendritiske celle aktivering
Chapters
Summary September 16th, 2018
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Eksperimentelle procedurer for efterfølgende udvinding af lymfatisk væv til at teste lymfoide dendritiske celle aktivering er beskrevet efter behandling af en immunstimulerende nanomateriale.
Transcript
Det overordnede mål med denne procedure er at gøre den unikke teknik, der kræves i at isolere mediastinal lymfeknude fra mus. Operationen blev udført efter injektion af immunstimulansmateriale på seks forskellige ruter i mus. I denne undersøgelse brugte vi en ny klasse af materiale, der danner nano-størrelse strukturer.
Overfladeaktive stoffer består af hydrofile hovedgruppe og hydrofobe hale. Disse danner sfæriske micelle eller anden sekundær struktur på grund af mikrofag adskillelse. Vi udnyttede denne egenskab til en bio makromolekyle, der er DNA.
DNA amfifile, vist her, som regelmæssige nukleotider som A, C, G, T, har hydrofile blokke, mens lipid modificeret neuro-celle nukleobaser fungere som hydrofobe enheder. Den modificerede oligo blev syntetiseret af DNA synthesizer i store otte ottekant octograms. I equi-media de amphifile lipid DNAs spontant danner nano-størrelse sfæriske micelles.
Når micelle dannes, forbliver DNA'et enkeltstrenget som en tom bærer med omkring 10 nanometer i diameter. For at udstyre luftfartsselskabet med immun-stimulerende, er det simpelt spørgsmål om at udvide DNA-sekvens med vejafgift-lignende receptor ni adjuvans nemlig eCpG. Lipid DNA og eCpG base her derfor den ydre overflade af micelle nedbrydes med CpG sekvens.
Vi navngiver derefter denne immunstimulerende nanopartikel som INP. For at bestemme den korrekte måde at INPs for immunrespons vi injiceres INPs til mus i 64 injektion ruter og dermed en ordentlig lymfeknude væv blev analyseret. For mere detaljeret injektion instruktion kan du finde en JOB artikel udgivet af Charles River i 2012.
Den største fordel ved denne video er visuelt viser, hvordan man får mediastinal lymfeknude. Videoen viser eksplicit placeringen af mediastinal lymfeknude, som en masse mennesker finder en vanskelighed i at isolere organer. Alle forsøg blev udført i henhold til retningslinjerne fra Den Institutionelle Animal Care and Use Udvalg på Shanghai Public Health Clinical Center, eller University of Ulsan College of Medicine.
Denne del vil vise den specifikke placering af organer eller væv, som er afgørende for immunologisk analyse. Milt og to lymfeknuder vil blive isoleret. Først og fremmest blev mus ofret af kuldioxid indånding dødshjælp og alle bestræbelser blev gjort for at minimere lidelser som efter vejledning af Institutionelle Animal Care and Use Committee.
Fra nu af skal vi finde organerne og isolere dem. Først korrekt fastgør musen på operationsbordet med fire ben på håndfladen. Steriliser dissektionsområdet med alkohol.
Disseker det ydre dække bunden af musen maven med en stor størrelse saks. Brug pinp til at åbne begge sider af fastgørelse og fastgør det med stifter på operationsbordet. Placeringen af lyskelymfeknude er udsat ved at finde sammen med fartøjet går ned mod venstre ben.
Formen af fartøjet ligner vippet alfabet bogstav Y.Afdække laget med snævren og trække det fra huden. Skær bughinden med mindre saks til at afsløre indre organer. Flyt tarmen til højre ved hjælp af kraftbiske derefter wrap i formet milt, som viser på venstre, øverste venstre side af maven.
Yderligere opmærksomhed er påkrævet under proceduren, da milten er let at forstyrre. Endelig det centrale punkt i denne video: høst mediastinal lymfeknude. Det er placeret under den øverste side af lungen, hvilket er svært at se på grund af sin lille størrelse og noget skjult placering.
Udsæt omhyggeligt området med en lille saks og en lille sceces. Skær begge sider af ribbenene og mellemgulvet så godt. Klip de afskårne ribben over brystet.
Under proceduren undgå at beskadige hjerte og blodkar, da det kan blinde stedet, finde den gennemskinnelige mediastinal lymfeknude. Hvis ved et uheld blodkarret brast, forsigtigt udslette blodet med gaze. Grib venstre side af lungen og forsigtigt vende det over til den anden side for at se under lungen.
Træk den mediastinal lymfeknude op ved hjælp af saft. Efter høst af mediastinal lymfeknude, Sørg for at perfekt fjerne alle de fedt og blod omkring lymfeknuden, da uønsket væv kan påvirke analysen. Endelig alle de isolerede organer på en petriskål fyldt med medier.
I alt 0,1 gange 10 til de sjette celler blev analyseret på denne flow cytometri. Baseret på kraft getter og størrelse getter leukocyt befolkning blev gated, og at cellerne blev udelukket af mørk farvning. 24 timer efter INP-injektion med 64 injektionsveje, milt, lyskelymfeknude og mediastinal lymfeknude blev høstet og analyseret DC-aktivering ved flowcytometri.
Baseret på strategien for flow cytometri DC population blev defineret som CD11C positive og afstamning negative celler i den levende leukocyt. Især, intranasal injektion af INP fremmes betydelige stigninger i CD40, 80, 86 udtryk i mediastinal lymfeknude sammenlignet med PBS for kontrol. Derfor, disse data foreslog, at intranasal injektion af INP kan bruges som en slimhinde adjuvans for forbedring af immunitet i lungerne.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
