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Immunostimulantes Agent Evaluation : Lymphoïde tissu Extraction et Injection Route-dépendante des cellules dendritiques Activation
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Summary September 16th, 2018
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Les procédures expérimentales pour l’extraction ultérieure des tissus lymphatiques pour tester l’activation des cellules dendritiques lymphoïdes sont décrites après traitement d’un nanomatériau immunostimulante.
Transcript
L’objectif global de cette procédure est de familiariser la technique unique requise pour isoler le ganglion lymphatique médiastinal des souris. L’opération a été menée après injection de matériel immunostimulant sur six voies différentes chez la souris. Dans cette étude, nous avons utilisé une nouvelle classe de matériaux formant des structures de taille nanométrique.
Les surfactants se composent du groupe de tête hydrophile et de la queue hydrophobe. Ceux-ci forment la micelle sphérique ou toute autre structure secondaire due à la séparation de microphage. Nous avons utilisé cette propriété à une macromolécule bio qui est l’ADN.
L’amphiphile d’ADN, montré ici, comme nucléotides réguliers tels que A, C, G, T, a des blocs hydrophiles tandis que les nucléobases neurocellaux modifiés de lipide agissent comme unités hydrophobes. L’oligo modifié a été synthétisé par synthétiseur d’ADN dans des octogrammes à grande échelle. Dans les équimédias, les DNAs lipidiques amphiphiliques forment spontanément des micelles sphériques de taille nanométrique.
Lorsque micelle est formé, l’ADN reste mono-échoué comme un transporteur vide avec environ 10 nanomètres de diamètre. Pour équiper le porteur d’un stimulant immunitaire, il est simple d’étendre la séquence d’ADN avec le récepteur à péage neuf adjuvants, à savoir eCpG. L’ADN lipidique et la base d’eCpG ici donc la surface externe de micelle est dégradée avec la séquence de CpG.
Nous nomment alors cette nano particule stimulante immunitaire comme l’INP. Afin de déterminer le bon moyen d’inps pour la réponse immunitaire, nous avons injecté des INP à des souris dans 64 voies d’injection et par conséquent un tissu de ganglion lymphatique approprié ont été analysés. Pour plus d’instructions d’injection, veuillez trouver un article job publié par Charles River en 2012.
Le principal avantage de cette vidéo est de montrer visuellement comment obtenir un ganglion lymphatique médiastinien. La vidéo montre explicitement l’emplacement du ganglion lymphatique médiastinien que beaucoup de gens trouvent une difficulté à isoler les organes. Toutes les expériences ont été menées en vertu des lignes directrices du Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux du Shanghai Public Health Clinical Center, ou University of Ulsan College of Medicine.
Cette partie montrera l’emplacement spécifique des organes ou des tissus, qui sont cruciaux pour l’analyse immunologique. La rate et deux ganglions lymphatiques seront isolés. Tout d’abord, les souris ont été sacrifiées par l’euthanasie par inhalation de dioxyde de carbone et tous les efforts ont été faits pour minimiser la souffrance comme suivant les conseils du Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux.
A partir de maintenant, trouvons les organes et isolons-les. Tout d’abord, bien fixer la souris sur le bureau d’opération avec quatre broches sur la paume de la souris. Stériliser la zone de dissection avec de l’alcool.
Disséquer la couverture extérieure du bas de l’abdomen de la souris avec un ciseaux de grande taille. Utilisez des forceps pour ouvrir les deux côtés de la fixation et le fixer avec des broches sur la table d’opération. L’emplacement du ganglion lymphatique inguinal est exposé en trouvant la conjonction du vaisseau descendant vers la jambe gauche.
La forme du navire ressemble à la lettre d’alphabet incliné Y.Découvrez la couche avec les forceps et tirez-la de la peau. Couper le péritoine avec de plus petits ciseaux pour exposer les organes internes. Déplacez l’intestin vers la droite en utilisant des forceps puis enveloppez dans la rate en forme, qui montrent sur la gauche, côté supérieur gauche de l’abdomen.
Une attention supplémentaire est nécessaire pendant la procédure car la rate est facile à perturber. Enfin, le point clé de cette vidéo: la récolte des ganglions lymphatiques médiastinaux. Il est situé sous le côté supérieur du poumon, ce qui est difficile à voir en raison de sa petite taille et l’emplacement quelque peu caché.
Exposez soigneusement la zone à l’aide de petits ciseaux et de forceps. Couper les deux côtés des côtes et le diaphragme ainsi. Couper les côtes coupées au-dessus de la poitrine.
Pendant la procédure éviter d’endommager le cœur et les vaisseaux sanguins car il pourrait aveugler le site, trouver le ganglion lymphatique médiastinal translucide. Si par accident le vaisseau sanguin éclate, essuyez doucement le sang avec de la gaze. Prenez le côté gauche du poumon et retournez-le doucement de l’autre côté pour voir sous le poumon.
Remontez le ganglion lymphatique médiastinal à l’aide de forceps. Après la récolte du ganglion lymphatique médiastinal, assurez-vous d’enlever parfaitement toute la graisse et le sang entourant le ganglion lymphatique puisque le tissu non désiré peut influencer l’analyse. Enfin, tous les organes isolés sur une boîte de Pétri rempli de médias.
Total 0,1 fois 10 à la sixième cellule ont été analysées sur cette cytométrie de flux. Basé sur le getter de force et la population de leucocyte de getter de taille a été fermé et que les cellules ont été exclues par la coloration foncée. 24 heures après injection d’INP par 64 voies d’injection, rate, ganglion lymphatique inguinal, et ganglion lymphatique médiastinal ont été récoltés et analysés activation de DC par cytométrie de flux.
Basé sur la stratégie de la population de DC de cytométrie de flux a été défini comme CD11C cellules positives et négatives de lignée dans le leucocyte vivant. Notamment, l’injection intranasale de l’INP a favorisé des augmentations significatives de l’expression de CD40, 80, 86 dans le ganglion lymphatique médiastinal comparé à PBS pour le contrôle. Par conséquent, ces données ont suggéré que l’injection intranasale de l’INP puisse être employée comme adjuvant muqueux pour l’amélioration de l’immunité dans le poumon.
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