Einzelsträngiger DNA (SsDNA) wurde ausgiebig als molekulare Erkennung Element (MRE) aufgrund seiner intrinsischen Eigenschaften für DNA-DNA Hybridisierung1,2berücksichtigt. Die Entwicklung von SsDNA synthetischer Systeme führt zu biologischen Anwendungen wie DNA-Microarrays3, Oligotherapeutics, Diagnostik und integrierte molekulare Erkennung basiert auf komplementäre Interaktionen4,5.
Bisher wurden erfolgreich Mikrometer-Skala Polymerpartikel mit mikrofluidischen Geräten demonstriert. Verschiedene Techniken der mikrofluidischen nachweislich um zu mächtig für die Herstellung von sehr homogene Mikrosphären auf kontinuierlichen Flow in der Microchannel Umwelt6,7.
In der Studie von Lee Et al. 8, eine Tröpfchen-basierte Mikrofluidik Plattform für Mikrofluidik-Synthese von copolymerizable Oligo-Mikrosphären und SsDNA Verstärkung wurde berichtet. Die mikrofluidischen Plattform besteht aus zwei PDMS (Polydimethylsiloxan) Schichten: einem oberen Teil mit einem Mikrofluidik-Channel-Netzwerk zur Erzeugung von Mikrosphären und einem unteren flachen Teil. Diese bestehen aus drei Arten von PDMS fluidische Kanäle: 1) einen Fluss mit Schwerpunkt Kanal für Tröpfchen Generation, (2) eine serpentine Kanal für das Mischen von zwei Lösungen und (3) eine sequenzielle Polymerisation Kanal für Mikrosphären Erstarrung. Sobald zwei nicht mischbare fließt in einen einzigen PDMS fluidische Kanal eingeführt werden, können die Ströme durch die schmale Öffnung Struktur erzwungen werden. Die Strömung Verhaltensweisen wie Kanalgeometrie, Durchfluss und Viskosität beeinflussen die Größe und Morphologie der Mikrosphären. Daher kann Microscale Monospheres9,10der Hauptstrom flüssigen unterteilt werden.
Hier ist eine detaillierte Mikrosphären-PCR-Protokoll für die Verstärkung der SsDNA zur Verfügung gestellt. Zunächst wird ein Droplet-basierte Mikrofluidik-Gerät-Design-Prozess beschrieben. Dann wird die Art und Weise, in welcher, die Polyacrylamid Mikrosphären mit zufälligen DNA Schablone komplementär funktionalisiert werden können, erklärt. Schließlich ist ein Mikrosphären-PCR-Protokoll zur Verstärkung SsDNA gezeigt.
Diese Methode kann helfen, schlüsselhafte Fragen in der kombinatorischen Technik des mikrofluidischen Systems und des molekularen Biotechnologie-Feldes zu beantworten, wie mikrofluidische Geräte und Asymmetrie-PCR-Methode. Die Hauptvorteile dieser Technik sind die effiziente Erzeugung hochhomogenisierter Mikrosphären und die Herstellung von einsträngiger DNA ohne zusätzliche Trennschritte. Die Implikationen dieser Technik erstrecken sich auf die Diagnose oder Therapie verschiedener Krankheiten.
Da die Generierung von einsträngiger DNA der Schlüssel für ap-ta-mo-sis-Assays ist, kann sie für die Detektion und Behandlung verwendet werden. Obwohl diese Methode Einblicke in dreidimensionale mikrofluidische Systeme in MEMS bieten kann, kann sie auch auf andere Systeme angewendet werden, die zur Erkennung und Behandlung von Krankheiten verwendet werden. Im Allgemeinen werden Personen, die neu bei dieser Methode sind, Schwierigkeiten haben, Flüssigkeiten richtig zu kontrollieren, die in umgekehrter Richtung fließen.
Die visuelle Demonstration dieser Methode ist entscheidend, um die Mikrosphärenbildung in der strömungsfokussierenden Geometrie und Erstarrung erzeugter Mikrosphären zu beobachte