ADN monocatenario (ssDNA) ha sido ampliamente considerado como un elemento de reconocimiento molecular (MRE) debido a sus propiedades intrínsecas para hibridación de ADN-DNA1,2. El desarrollo de sistemas sintéticos ssDNA puede conducir a aplicaciones biológicas como ADN microarrays3, oligotherapeutics, diagnóstico y detección molecular integrado basado en interacciones complementarias4,5.
Hasta la fecha, las partículas de polímero de micrómetro-escala han demostrado con éxito utilizando dispositivos microfluídicos. Varias técnicas de microfluidos han demostrado para ser potentes para la producción de microesferas muy homogéneas en un flujo continuo en el entorno de microchannel6,7.
En el estudio de Lee et al. se informó de 8, una plataforma de microfluídica basada en gotas para la síntesis de microfluídica de amplificación microesfera de oligo y ssDNA copolymerizable. La plataforma de microfluidos consiste en dos capas PDMS (polidimetilsiloxano): una parte superior con una red de canal de microfluidos para la generación de la microesfera y un fondo plano parte. Éstos consisten en tres tipos de canales fluídicos PDMS: 1) un flujo enfoque canal para la generación de gotas, 2) un canal serpenteante para la mezcla de dos soluciones y 3) un canal de polimerización secuencial para la solidificación de la microesfera. Una vez que se introducen dos flujos inmiscibles en un solo canal fluídico de PDMS, los flujos pueden ser forzados a través de la estructura del orificio estrecho. Los comportamientos de flujo tales como la geometría del canal, caudal y la viscosidad afectan el tamaño y la morfología de la microesfera. Por lo tanto, la corriente líquida principal puede dividirse en microescala monospheres9,10.
Aquí, se proporciona un protocolo detallado de microesfera-PCR para la amplificación de ssDNA. En primer lugar, se describe un proceso de diseño de dispositivos microfluídicos basada en gotas. A continuación, se explica la manera en que la poliacrilamida microesferas pueden ser funcionalizadas con plantilla de ADN al azar de manera complementaria. Por último, se muestra un protocolo de microesfera-PCR para amplificar ssDNA.
Este método puede ayudar a responder preguntas clave en la técnica combinatoria del sistema microfluídico y el campo de la biotecnología molecular, como los dispositivos microfluídicos y el método de pcR de asimetría. Las principales ventajas de esta técnica son la generación eficiente de microesferas altamente homogeneizadas y la producción de ADN de una sola cadena sin ningún paso de separación adicional. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia el diagnóstico o la terapia de diversas enfermedades.
Debido a que la generación de ADN de una sola cadena es clave para los ensayos ap-ta-mo-sis, se puede utilizar para la detección y el tratamiento. Aunque este método puede proporcionar información sobre el sistema microfluídico tridimensional en MEMS, también se puede aplicar a otros sistemas utilizados para la detección y el tratamiento de la enfermedad. Generalmente, los individuos nuevos en este método tendrán dificultades para controlar adecuadamente los fluidos de fluir en la dirección inversa.
La demostración visual de este método es fundamental para observar la formación de la microesfera en la geometría de enfoque de flujo y la solidificación de las microesferas gener