단일 가닥 DNA (ssDNA) DNA-DNA 교 잡1,2에 대 한 본질적인 속성 때문 분자 인식 요소 (MRE)으로 광범위 하 게 고려 하고있다. SsDNA 합성 시스템의 개발 생물학 응용 DNA microarrays3, oligotherapeutics, 진단 및 보완 상호 작용4,5에 따라 통합 분자 감지 등 발생할 수 있습니다.

날짜 하려면, 마이크로미터 스케일 폴리머 입자는 성공적으로 시연 미세 장치를 사용 하 여. 여러 미세 기술 아닌 환경6,7연속 흐름에 매우 동질적인 스피어를 생산에 대 한 강력한 것으로 입증 되었습니다.

이 외 의 연구에서 8, copolymerizable 올리고 스피어와 ssDNA 증폭의 미세 합성에 대 한 미세 물방울 기반 플랫폼으로 알려졌다. 2 개의 PDMS (입니다) 층의 미세 플랫폼 구성: 스피어 및 아래쪽 평면 부분을 생성 하기 위한 미세 채널 네트워크와 위쪽 부분. 이 세 종류의 PDMS 유체 채널 구성: 1) 물방울 생성에 대 한 채널, 2)는 뱀 두 가지 솔루션, 혼합 채널과 채널 3)는 연속 중 합 스피어 응고에 대 한 초점을 맞추고 흐름. 일단 2 개의 혼합할 수 없는 흐름 PDMS 유체 채널에 소개는, 좁은 구멍 구조를 통해 흐름을 강제로 있습니다. 채널 형상, 유량, 점도 등 흐름 동작 크기와는 스피어의 형태에 영향을 줍니다. 따라서, 주요 액체 스트림 미 monospheres9,10으로 나눌 수 있습니다.

여기, 자세한 스피어-PCR 프로토콜 ssDNA의 증폭에 대 한 제공 됩니다. 첫째, 미세 물방울 기반 장치 설계 과정을 설명 합니다. 그런 다음, 어떤 polyacrylamide에 스피어 수 수 functionalized 무작위 DNA 템플렛으로 보완 하는 방식에서 하는 방법 설명 했다. 마지막으로, 스피어-PCR 프로토콜 ssDNA를 증폭에 대 한 표시 됩니다.

이 방법은 미세 유체 시스템 및 분자 생명 공학 분야의 결합 기술(예: 미세 유체 장치 및 비대칭 PCR 방법)의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있다. 이 기술의 주요 장점은 고균화 된 미세 구체의 효율적인 생성과 추가 분리 단계없이 단일 좌초 DNA의 생산입니다. 이 기술의 의미는 다양한 질병의 진단 또는 치료로 확장됩니다.

단일 가닥 DNA의 생성은 ap-ta-mo-sis assays의 핵심이기 때문에 검출 및 치료에 사용할 수 있습니다. 이 방법은 MEMS의 3차원 미세 유체 시스템에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만 질병의 검출 및 치료에 사용되는 다른 시스템에도 적용될 수 있습니다. 일반적으로,이 방법에 새로운 개인은 제대로 역 방향으로 흐르는에서 유체를 제어하는 데 어려움을 겪을 것이다.

이 방법의 시각적 데모는 유동 초점 형상및 생성된 마이크로스피어의 응고에서 마이크로스피어 형성을 관찰하는 데 매우 중요합니다. 첫째, 염기 폴리머와 촉매를 10 대 1 비율로 혼합하여 액체 PDMS 프리 폴리머 20 밀리리터를 준비합니다. 액체 PDMS의 10 밀리리터를 미세 유체 네트워크의 상부에 대한 실리콘 웨이퍼에 준비된 SU-8 금형에 붓습니다.

바닥 플랫 부품의 경우 금형 구조없이 실리콘 웨이퍼에 동일한 양의 액체 PDMS를 붓습니다. 액체 PDMS 프리 폴리머로 코팅 된 두 개의 실리콘 웨이퍼를 예열 된 핫 플레이트에 놓고 섭씨 75도에서 30 분 동안 치료하십시오. 이에 따라 SU-8 금형에서 경화 된 PDMS 층을 수동으로 벗깁니다.

1.5mm 직경의 둥근 구멍 펀칭 도구를 복제된 미세 유체 네트워크의 오일 포트에 정렬하여 미크론 스케일 흐름 채널을 거시적 유체 샘플과 상호 결합합니다. 그런 다음 수동으로 관통 구멍을 펀치. 펀칭 공정을 세 번 반복한 후, 샘플당 몇 초 동안 핸드헬드 코로나 치료기를 사용하여 상하 PDMS 층 모두에서 친수성 표면 처리를 수행합니다.

PDMS-PDMS 접합 공정을 위해 핫플레이트에서 플라즈마 처리된 PDMS 층 2개와 열 이 90도에서 30분간 가열합니다. 소용돌이와 간략하게 원심분리기 표준 단일 좌초 DNA 아크라디트 라벨 프로브와 19 대 1 아크릴아미드 비스 스톡 솔루션. 40%의 아크릴아미드 비스 용액 25마이크로리터, 단일 가닥 DNA 10마이크로리터, 5X TBE 버퍼 10마이크로리터, 5마이크로리터의 물을 혼합하여 솔루션을 준비합니다.

20% 암모늄 아황산염의