Single-stranded DNA (ssDNA) heeft uitgebreid beschouwd als een element van de moleculaire erkenning (MRE) als gevolg van zijn intrinsieke eigenschappen voor DNA-DNA hybridisatie1,2. De ontwikkeling van ssDNA synthetische systemen kan leiden tot biologische toepassingen zoals DNA microarrays3, oligotherapeutics, diagnostiek en geïntegreerde moleculaire detectie op basis van aanvullende interacties4,5.
Tot op heden zijn micrometer-schaal polymeer deeltjes met succes aangetoond met behulp van microfluidic-apparaten. Verschillende technieken van de microfluidic hebben bewezen te krachtig voor het produceren van zeer homogene microsferen op continue stroom in de microchannel milieu6,7.
In de studie van Lee et al. 8, een druppel gebaseerde microfluidic platform voor de microfluidic synthese van copolymerizable oligo-microsfeer en ssDNA versterking werd gemeld. Het microfluidic platform bestaat uit twee lagen van het PDMS (Polydimethylsiloxaan): een bovenste deel met een microfluidic channel-netwerk voor het genereren van de microsfeer en een bodem plat deel. Deze bestaan uit drie soorten PDMS fluidic kanalen: 1) een stroom focussering kanaal voor druppel-generatie, 2) een serpentine kanaal voor het mengen van twee oplossingen, en 3) een sequentiële polymerisatie-kanaal voor microsfeer stollen. Zodra twee onmengbare stromen in een PDMS fluidic enkellijns worden binnengebracht, kunnen de stromen worden gedwongen door de smalle opening structuur. De stroom gedrag zoals kanaal geometrie, debiet en viscositeit van invloed op de grootte en morfologie van de microsfeer. Daarom is de belangrijkste vloeibare stroom kan worden onderverdeeld in microscale monospheres9,10.
Hier vindt u een gedetailleerde microsfeer-PCR protocol voor de amplificatie van ssDNA. Ten eerste wordt een druppel gebaseerde microfluidic apparaat ontwerpproces beschreven. Dan, de manier waarop in welke polyacrylamide microbolletjes met willekeurige DNA sjabloon kan worden matiemaatschappij op een complementaire manier wordt uitgelegd. Tot slot wordt een microsfeer-PCR protocol voor het versterken van de ssDNA weergegeven.
Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in de combinatorische techniek van het microfluïde systeem en het moleculaire biotechnologieveld, zoals microfluïde apparaten en asymmetrie-PCR-methode. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn het efficiënt genereren van sterk gehomogeniseerde microsferen en de productie van enkelstrengs DNA zonder extra scheidingsstappen. De implicaties van deze techniek breiden zich uit naar de diagnose of therapie van verschillende ziekten.
Omdat het genereren van single-streng DNA de sleutel is voor ap-ta-mo-sis tests, kan het worden gebruikt voor detectie en behandeling. Hoewel deze methode inzicht kan geven in driedimensionaal microfluïdisch systeem in MEMS, kan het ook worden toegepast op andere systemen die worden gebruikt voor detectie en behandeling van ziekten. Over het algemeen, individuen nieuw op deze methode zal moeite hebben om goed te controleren vloeistoffen uit stroomt in de omgekeerde richting.
Visuele demonstratie van deze methode is van cruciaal belang om de microsfeervorming in de flow-focus geometrie en stolling van gegenereerde microsferen te observeren. Bereid eerst 20 milliliter vloeibaar PDMS-voo