Single-stranded DNA (ssDNA) tem sido amplamente considerado como um elemento de reconhecimento molecular (ERM) devido a suas propriedades intrínsecas para hibridação de DNA-DNA1,2. O desenvolvimento de sistemas sintéticos ssDNA pode levar a aplicações biológicas, tais como o DNA microarrays3, oligotherapeutics, diagnóstico e detecção molecular integrada com base em interações complementares4,5.
Até à data, as partículas de polímero do micrômetro-escala tem sido com sucesso demonstradas usando dispositivos microfluídicos. Várias técnicas de microfluidic tem sido provadas para ser poderoso para produzir altamente homogêneas microesferas em fluxo contínuo no ambiente microchannel6,7.
No estudo de Lee et al . 8, uma plataforma baseada em gotículas microfluidic para a síntese de microfluidic de amplificação oligo-microesfera e ssDNA copolymerizable foi relatado. A plataforma microfluidic consiste de duas camadas PDMS (polidimetilsiloxano): uma parte superior com uma rede de canais microfluídicos para gerar microesfera e um parte plana de fundo. Estes consistem de três tipos de canais fluídico PDMS: 1) um fluxo de focagem canal para geração de gotículas, 2) é um canal de serpentino para misturar as duas soluções e 3) um canal de polimerização sequencial para solidificação de microesfera. Uma vez que dois fluxos imiscíveis são introduzidos em um único canal PDMS fluídico, os fluxos podem ser forçados através da estrutura de orifício estreito. Os comportamentos de fluxo como geometria do canal, taxa de fluxo e viscosidade afetam o tamanho e morfologia da microesfera. Portanto, o principal fluxo de líquido pode ser dividido em microescala monospheres9,10.
Aqui, um protocolo detalhado microesfera-PCR é fornecido para a amplificação do ssDNA. Em primeiro lugar, um processo de design do dispositivo baseado em gotículas microfluidic é descrito. Então, a maneira na qual poliacrilamida microesferas podem ser acrescidas com modelo de DNA aleatório de modo complementar, é explicada. Finalmente, um protocolo de microesfera-PCR para amplificação ssDNA é mostrado.
Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave na técnica combinatória do sistema microfluido e no campo da biotecnologia molecular, como dispositivos microfluidos e método de assimetria PCR. As principais vantagens desta técnica são a geração eficiente de microesferas altamente homogeneizadas e a produção de DNA mono-encalhado sem quaisquer etapas adicionais de separação. As implicações dessa técnica se estendem ao diagnóstico ou terapia de várias doenças.
Como a geração de DNA de uma única cadeia é a chave para ensaios ap-ta-mo-sis, ele pode ser usado para detecção e tratamento. Embora este método possa fornecer insights sobre o sistema microfluido tridimensional no MEMS, ele também pode ser aplicado a outros sistemas usados para detecção e tratamento de doenças. Geralmente, indivíduos novos neste método lutarão para controlar adequadamente os fluidos de fluir na direção inversa.
A demonstração visual deste método é fundamental para observar a formação da microesfera na geometria de foco de fluxo e solidificação das microesferas geradas. Primeiro, prepare 20 mililitros de PDMS líquido pré-polímero misturando polímero base e catalisador em uma proporção de 10 para um. Despeje