Biology
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उपंयास कीटनाशक Chemistries मच्छरों के विषाक्तता के परीक्षण के लिए प्रोटोकॉल
Chapters
Summary February 13th, 2019
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प्रोटोकॉल डिमंकनाशी, adulticides और endectocides की नई कक्षाओं के रूप में विकास के लिए अपरिपक्व और वयस्क मच्छरों के लिए chemistries की विषाक्तता का आकलन करने के लिए वर्णित हैं । प्रोटोकॉल एकल बिंदु खुराक और बाद में मूल्यांकन पर एकाधिक chemistries के उच्च प्रवाह परीक्षण सक्षम करें खुराक प्रतिक्रिया परख के माध्यम से संपर्क पर विषाक्तता निर्धारित करने के लिए या घूस के माध्यम.
Transcript
यह विधि कीटनाशक खोज और वेक्टर नियंत्रण क्षेत्रों में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब देने में मदद कर सकती है। जैसे, मच्छर लार्वा या वयस्कों की आबादी के लिए एक असुधारित रसायन कितना विषाक्त है? क्या रसायन विज्ञान में लार्वानाशक या व्यभिचार के रूप में विकास की संभावना है?
और, सबसे प्रभावी वितरण मार्ग क्या हो सकता है? इस तकनीक के मुख्य फायदे यह हैं कि इसका उपयोग असंफॉर्मेटेड रसायनों की विषाक्तता का मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है वेक्टर मच्छरों की कई प्रजातियों के खिलाफ रसायन शास्त्र की विषाक्तता, और इसे उच्च थ्रूपुट क्षमता में सैकड़ों यौगिकों को अवमूल्यन करने के लिए बढ़ाया जा सकता है। प्रक्रिया का प्रदर्शन जसलीन कौर, मेरी प्रयोगशाला से एक वैज्ञानिक तकनीशियन होगा ।
शुरू करने के लिए, एक 24 अच्छी तरह से ऊतक संस्कृति प्लेट के कुओं लेबल । टेस्ट कंपाउंड को तौलने के लिए एनालिटिकल बैलेंस का इस्तेमाल करें। फिर, 1.5 मीटर ट्यूब में बाँझ डबल आसुत पानी में यौगिक को उजाड़ दें, जिसके परिणामस्वरूप 80 मीटर स्टॉक समाधान होता है।
इसके बाद, वांछित सांद्रता के काम करने वाले स्टॉक समाधान तैयार करने के लिए डबल आसुत पानी का उपयोग करके स्टॉक समाधान को क्रमिक रूप से पतला करें। ध्यान दें कि देखभाल की जानी चाहिए लार्वा को अतिरिक्त पानी को हटाने के दौरान कुओं में जोड़ा जाता है, और जब लार्वा को शारीरिक क्षति से बचने के लिए परीक्षण रसायन शास्त्र जोड़ा जाता है। चोट मृत्यु दर में वृद्धि हो सकती है, और इस प्रकार झूठे सकारात्मक परिणाम पैदा या परख अमान्य ।
प्लेट के प्रत्येक कुएं में पांच तिहाई इंस्टार लार्वा स्थानांतरित करने के लिए एक विस्तृत बोर प्लास्टिक ट्रांसफर पिपेट का उपयोग करें। फिर, पानी को धीरे-धीरे हटाने के लिए एक एमएल पिपेट का उपयोग करें, और इसे डबल आसुत पानी की वांछित मात्रा से बदलें। ध्यान रखें कि पानी को हटाते समय लार्वा को जल्दी से न छूना ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि लार्वा कम न हो, और धीरे-धीरे प्लास्टिक के विपरीत पक्ष के खिलाफ पाइपिंग करके परीक्षण रसायन को जोड़ें।
प्रत्येक अच्छी तरह से परीक्षण समाधान की एक उपयुक्त मात्रा जोड़ें, और एक समान मिश्रण सुनिश्चित करने के लिए धीरे से प्लेट घुमाएं। 75 से 85 प्रतिशत सापेक्ष आर्द्रता के साथ 25 डिग्री सेल्सियस पर 12 घंटे प्रकाश/अंधेरे चक्र को बनाए रखने के विकास कक्ष में प्लेट रखें। लार्वा आंदोलन की जांच करने के लिए, धीरे-धीरे प्लेट पर टैप करें।
यदि कोई आंदोलन नहीं देखा जाता है, तो धीरे-धीरे लार्वा को बाँझ टूथपिक से स्पर्श करें। यदि कोई प्रतिक्रिया नहीं देखी जाती है तो लार्वा को मृत के रूप में स्कोर करें, और टेक्स्ट प्रोटोकॉल में वर्णित समय बिंदुओं पर, प्रत्येक कुएं में मृत लार्वा की कुल संख्या को रिकॉर्ड करने के लिए एक स्कोर शीट का उपयोग करें। संस्कृति एक 20 लीटर प्लास्टिक पिंजरे में तीन से पांच दिन पुराने वयस्क मादा मच्छरों ।
परीक्षण यौगिक के नाम और एकाग्रता के साथ नौ औंस पेपर कप लेबल करें। इसके बाद, 20mL ग्लास शीशी में एसीटोन में परीक्षण यौगिक का 10mg/एमएल स्टॉक समाधान तैयार करें। फिर, वांछित काम सांद्रता प्राप्त करने के लिए स्टॉक समाधान को क्रमिक रूप से पतला करें।
एसीटोन के साथ एक एमएल ग्लास सिरिंज को साफ करें। फिर इसे उचित एकाग्रता पर परीक्षण समाधान के साथ भरें। 0.25uL की मात्रा देने के लिए समायोजित माइक्रो-एप्लीकेटर में सिरिंज को सुरक्षित करें।
इसके बाद, पिंजरे से 10, तीन से पांच दिन पुराने वयस्क मादा मच्छरों को हटाने के लिए एक एस्पिरेटर का उपयोग करें। उन्हें चार डिग्री सेल्सियस पर पांच मिनट के लिए एनेस्थेटाइज करें। फिर मच्छरों को पेट्री डिश में स्थानांतरित करें।
डिश को 10 मिनट के लिए बर्फ पर रखें। वयस्क मच्छर को नुकसान पहुंचाने से बचने के लिए, जो मृत्यु दर में योगदान दे सकता है, यह सुनिश्चित करें कि वे पांच मिनट से अधिक समय तक फ्रिज में एनेस्थेटाइज्ड न हों, या 10 से अधिक के लिए बर्फ पर स्थिर न हों, और मच्छरों की हैंडलिंग को कम करें। यदि आपके पास ठंडी प्लेट और चल चरण के साथ एक माइक्रोमैनीपुलेटर तक पहुंच है, जो मच्छरों की हैंडलिंग को और कम कर सकता है।
डिश से प्रत्येक मच्छर को हटाने के लिए ठीक चिमटी का प्रयोग करें। सिरिंज माइक्रो-एप्लीकेटर के साथ एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप नेक्स्ट के तहत, पृष्ठीय छाती के लिए परीक्षण समाधान के 0.25uL लागू होते हैं, मच्छरों को बर्फ पर एक लेबल पेपर कप में स्थानांतरित करें। कप को 10 बाय 10 सेमी जाल स्क्वायर और एक रबर बैंड के साथ सील करें, इसे विकास कक्ष में स्थानांतरित करें, और पहले वर्णित मृत मच्छरों की संख्या रिकॉर्ड करें।
एक एस्पिरेटर के साथ लगभग 150 चार से पांच दिन पुराने वयस्क मादा मच्छरों को इकट्ठा करें, और उन्हें एक अलग पिंजरे में स्थानांतरित करें। भोजन परख से एक से 24 घंटे पहले चीनी के स्रोत को हटा दें। पानी में परीक्षण यौगिक का 80mM स्टॉक समाधान तैयार करें।
फिर, वांछित सांद्रता के काम स्टॉक समाधान प्राप्त करने के लिए, पानी के साथ इसे क्रमिक रूप से पतला करें। वांछित परीक्षण सांद्रता प्राप्त करने के लिए, प्रत्येक कमजोर पड़ने के 40uL को 1.5 मीटर ट्यूब में डिफिब्रिनेट खरगोश रक्त के 960uL में जोड़ें, और पाइपिंग द्वारा मिलाएं। एक फीडिंग यूनिट पर एक सदस्य फिल्टर रखें और इसे रबर की अंगूठी से सील करें।
इसके बाद, फीडिंग यूनिट के रिवर्स साइड पर स्थित डिलीवरी पोर्ट के माध्यम से परीक्षण समाधान के साथ रक्त के एक एमएल को स्थानांतरित करने के लिए एक पिपेट का उपयोग करें। एक हीटिंग यूनिट के लिए खिला इकाई संलग्न करें। फिर, ताजा तैयार 10 प्रतिशत लैक्टिक एसिड समाधान के साथ झिल्ली की सतह धीरे झाड़ू।
पिंजरे में फीडिंग यूनिट रखें। पिंजरे को एक काले कपड़े से ढक दें, और मच्छरों को एक घंटे तक खिलाने की अनुमति दें। मच्छरों को खिलाने के बाद पिंजरे को मच्छरों को एनेस्थेटाइज करने के लिए पांच मिनट के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर फ्रिज में रखें।
फिर, पिंजरे में मच्छरों की कुल संख्या को गिनें और रिकॉर्ड करें। पेट की जांच करके, पूरी तरह से और आंशिक रूप से खिलाया मादा मच्छरों की कुल संख्या को गिनें और रिकॉर्ड करें। प्रति खुराक कम से कम 50 रक्त खिलाया मच्छरों प्राप्त किया जाना चाहिए।
किसी भी मच्छर को हटा दें जिन्होंने खिलाया नहीं है। इसके बाद, पिंजरे को एक विकास कक्ष में स्थानांतरित करें, और उचित समय बिंदुओं पर मृत मच्छरों की संख्या रिकॉर्ड करने के लिए एक स्कोर शीट का उपयोग करें। दिन तीन पोस्ट ब्लड फीडिंग पर 72 घंटे तक पिंजरे में एक एगकप रखें।
उपचार के अनुसार उत्पादित अंडों की कुल संख्या की गणना करने के लिए एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप का उपयोग करें। समय के साथ लार्वा मृत्यु दर पर एक डोपामाइन रिसेप्टर विरोधी, अमित्रिप्टीलिन के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए एक लार्वा संपर्क परख का प्रदर्शन किया गया था। आंकड़ों से पता चला है कि प्रयोग के समय पाठ्यक्रम के साथ एलसी ५० मूल्य कम हो जाता है ।
वयस्क मादा मच्छरों की मृत्यु दर पर अमितिप्टीलिन के प्रभाव की तुलना बिफेन्थ्रिन और दो नकारात्मक नियंत्रणों से की गई थी। एसीटोन उपचारित और अनुपचारित नकारात्मक नियंत्रणों की तुलना में, अमित्रिप्टीलाइन और बिफेन्थ्रिन दोनों ने प्रत्येक प्रयोगात्मक समय बिंदु पर महत्वपूर्ण मृत्यु दर को प्रेरित किया। वयस्क मादा मच्छरों की मल और प्रतिशत मृत्यु दर पर एमिरिप्टिलीन की तीन अलग-अलग खुराकों के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए एक मात्रात्मक भोजन परख की गई थी।
आंकड़ों से पता चला है कि केवल रक्त-फेड नियंत्रणों की तुलना में उच्चतम खुराक पर एमिरिप्टिलिन फेड मच्छरों की fecundity में कोई सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर नहीं है । एक बार महारत हासिल है, परख हम यहां वर्णित है की किसी भी, लगभग दो घंटे में एक ही व्यक्ति द्वारा पूरा किया जा सकता है, अगर ठीक से प्रदर्शन किया । इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, जीव को धीरे-धीरे संभालना याद रखना महत्वपूर्ण है, और सामयिक अनुप्रयोगों के दौरान और स्कोरिंग लार्वा या वयस्क परख के दौरान स्थिरता होनी चाहिए।
इस प्रक्रिया के बाद, जैव-परख जैसे अन्य तरीके अवशोषण के माध्यम से विषाक्तता का मूल्यांकन करने के लिए, मच्छर टार्सी के माध्यम से, सीडीसी बोतल परख, और डब्ल्यूएचओ ट्यूब परख को असुधारित रसायन विज्ञान, या एक तैयार उत्पाद की प्रभावकारिता के बारे में अतिरिक्त सवालों के जवाब देने के लिए किया जा सकता है, और संपर्क कीटनाशक या अंतरिक्ष स्प्रे के रूप में विकास की क्षमता।
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