Medicine
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Génération d’un modèle de Cancer du sein métastatique orthotopique murin et effectuant une mastectomie radicale Murine
Chapters
Summary November 29th, 2018
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Nous introduisons un modèle de cancer du sein orthotopique murin et modèle de mastectomie radicale avec la technologie de la bioluminescence pour quantifier le fardeau tumoral pour imiter la progression du cancer du sein humain.
Transcript
Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine du cancer du sein sur la façon d’imiter la progression du cancer du sein humain et le traitement dans un modèle de souris. Le principal avantage de ce modèle de cancer du sein de souris est qu’il a un taux élevé de tumorigenesis après implantation orthotopique et un taux local bas de répétition après mastectomie. Commencez par confirmer un manque de réponse au pincement des pieds chez une souris femelle anesthésiée et en tapant les membres de l’animal sur un tableau chirurgical.
À l’aide d’écouvillons stériles, stériliser la zone chirurgicale avec de la chlorhexidine, de l’iode et 75 % d’éthanol. Et faire une incision cutanée de cinq millimètres au milieu de la paroi thoracique antérieure. Soulevez ensuite le côté droit de la peau adjacente à l’incision et utilisez des ciseaux de microdissection stériles pour détacher la peau de la paroi thoracique.
Inverser la peau pour exposer le bon numéro deux tampon de graisse mammaire et utiliser une seringue d’insuline d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 28,5 pour injecter soigneusement 20 microlitres de suspension cellulaire cancéreuse à travers la plaie dans le tampon de graisse. Maintenez l’aiguille dans la garniture de graisse pendant cinq secondes pour permettre au mélange gélatineux de protéine de cellules cancéreuses de solidifier avant d’enlever l’aiguille, et fermant l’incision avec les sutures nonabsorbables stériles de 5-0. Placez ensuite l’animal dans une cage propre avec surveillance jusqu’à ce qu’il soit pleinement couché.
Pour effectuer la mastectomie huit jours après l’inoculation du cancer préparer la souris pour la chirurgie comme vient de le démontrer, et faire une incision de la peau de cinq millimètres deux millimètres à gauche de la cicatrice chirurgicale de l’inoculation des cellules cancéreuses. Étendre l’incision vers la racine du membre antérieur pour enlever la tumeur, et la peau, y compris la cicatrice chirurgicale, et la lésion en contact avec la tumeur, et le bassin axillaire des ganglions lymphatiques dans lequel généralement aucun ganglion lymphatique visible n’est présent au moment de la mastectomie. Puis fermez les défauts de la peau avec des sutures stériles 5-0 nonabsorbables en forme de Y.Et retournez l’animal dans sa cage avec surveillance jusqu’à l’incumbency complète.
Pour la quantification des métastases pulmonaires 21 jours après l’inoculation injecter 150 milligrammes par kilogramme de IP D-Luciferin 15 minutes avant l’euthanasie. Et utilisez des ciseaux Mayo incurvés pour ouvrir la peau et le péritoine au milieu de l’abdomen. Appuyez sur le foie jusqu’à ce que le diaphragme puisse être visualisé, et couper le diaphragme et les côtes bilatérales du caudad au céphalad.
Retournez la paroi thorax antérieure pour exposer les poumons et soulever les poumons pour identifier l’œsophage thoracique, qui ressemble à un cordon reliant les poumons à la colonne vertébrale. Couper l’œsophage avec des ciseaux de microdissection et utiliser des forceps pour tirer les poumons bilatéraux et le cœur vers le caudad. Ensuite, couper la trachée et les principaux vaisseaux à l’apex pulmonaire à la céphalade et placer les poumons dans une boîte de Petri de 10 centimètres pour l’imagerie bioluminescente.
Utilisez les ciseaux pour enlever le cœur du tissu pulmonaire. Commençant à environ huit jours après l’inoculation mammaire de cellules cancéreuses de garniture de graisse la bioluminescence dans les poumons est plus profonde et plus petite que dans la lésion primaire reflétant le fardeau primaire de tumeur chez les souris vivantes. La mesure de la taille de tumeur avec des étriers permet l’estimation du volume de tumeur in situ.
Ce modèle de mastectomie permet également la surveillance métastatique en série de charge de tumeur sans devoir euthanasier les animaux. La charge tumorale des métastases pulmonaires peut également être quantifiée par imagerie ex vivo, mais la limitation est que les souris doivent être euthanasiées. La survie de la souris après un traitement chirurgical peut également être surveillée comme un point final clinique traduisible.
Après son développement, cette technique a ouvert la voie à des chercheurs dans le domaine du cancer du sein pour explorer non seulement le développement de nouveaux médicaments, mais aussi la recherche sur le cancer du sein en général.
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