Immunology and Infection
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
En sølv nanopartikler metode til mildne biliær atresi syndrom i mus
Chapters
Summary October 13th, 2018
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Denne artikel beskriver i detaljer en metode baseret på sølv nanopartikler til mildne biliær atresi syndrom i en eksperimentel biliær atresi musemodel. En solid forståelse af reagens forberedelsesprocessen og neonatal mus injektionsteknik hjælper stifte forskere med metoden anvendt i neonatal musen model undersøgelser.
Transcript
Disse metoder kan hjælpe med at besvare centrale spørgsmål i galdeatresi. Af BA synspunkter om sygdom, patogenese og behandling. Den største fordel ved denne teknik er, at neonatal mus injektion teknik vil hjælpe forskerne til at blive fortrolig med metoden for andre neonatal mus model undersøgelser.
Konsekvenserne af denne teknik strækker sig mod behandling af BA som flere nanopartikler af betydning Selvom denne metode kan give indsigt i BA-behandling, kan det også anvendes på andre systemer såsom neonatal musemodeller af patogenesen af denne Generelt på den måde, dette til denne metode vil, fordi den lille størrelse af neonatal mus kan resultere i opbygningen af injektion proces. For at etablere galdeatresi i en musemodel, skal resus rotovirus indlæses i en 1 milliliter insulinsprøjte udstyret med en 29-gauge nål, og intraperitoneally levere 1,2 gange 10 til 5th plaque-dannende enheder af virus i 20 mikroliters af Dulbecco's Modified Eagle Medium til hver nyfødte inden for 24 timer efter fødslen. Derefter returnere nyfødte til deres mor til daglig overvågning og vejning.
Når neonatal dyr begynder at udstille tegn på gulsot, belastning en en milliliter sprøjte udstyret med en 29-gauge nål med 50 mikroliter frisklavet sølv nanopartikel kollagen løsning per dyr og bruge ringfingeren til at trykke benet af en gulsot dyr skråt over højre lår. Langsomt indføre nålen i en 15 graders vinkel i bughinden, og ved at nå overfladen af den nederste kant af leveren, injicere sølv nanopartikel kollagen blanding. Når hele blandingen er blevet injiceret, langsomt fjerne nålen og lad dyret hvile i ti minutter for at tillade kollagen til at størkne og for at forhindre moderen i at slikke injektionsstedet.
Derefter returnere musene til deres bure til daglig overvågning. På dag ni eller tolv efter vaccination, sterilisere øvre og nedre del af maven med 75% ethanol, og immobilisere lemmer af en inficeret mus. Åbn huden, musklen og bughinden langs midterlinjen til xyphoid, og brug en steril vatpind til at fjerne mave-tarmkanalen til fuldt ud at eksponere mellemgulvet.
Stik nålen på en milliliter insulinsprøjt i hjertets venstre hjertekammer, og træk langsomt sprøjtestemplet tilbage for at opnå det maksimale blodvolumen. Overfør blodet til et 1,5 milliliterrør i en 30 minutters inkubation ved stuetemperatur og pellet de røde blodlegemer ved centrifugering. Derefter indsamles serum til senere analyse.
For ekstrahepatisk cholangiografi, bruge en vatpind til fuldt ud at eksponere leveren, galdeblæren og ekstrahepatiske galdegangene. Efter at have fotograferet udseendet af leveren og galdegangene under et dissekerende mikroskop, skal du bruge oftalmologiske kraftvipper til forsigtigt at gribe fat i bunden af galdeblæren og langsomt indsætte nålen på en en milliliter sprøjte lastet med methylenblå opløsning i galdeblærehulen. Gribe nålen med snævler, langsomt indgyde 10-20 mikroliter af methylenblåt.
Når farvestoffet passerer gennem ekstrahepatiske galdegange til jejunum, få et andet fotografi af vævet. Derefter for hæmatoxylin og eosin farvning, høste leveren fra hvert dyr til natten fiksering i 10% formalin. Næste morgen, indlejre prøverne i paraffin til trækning, efterfulgt af de-voksning re-hydrering med en ethanol serie og hæmoxylin og eosin farvning i henhold til standard histopatologiske analyseprotokoller.
Sammenlignet med ubehandlede galdeatresi mus, sølv nanopartikel behandlede dyr demonstrere reduceret gulsot og opretholde deres normale kropsvægt. Niveauerne af bilirubin metabolisme og hepatisk transaminase falde til normale kontrolværdier, hvilket tyder på, at sølv nanopartikler i høj grad forbedre leverfunktionen. Ekstrahepatisk cholangiografi med methylenblå farvning bekræfter galdegang patency efter sølv nanopartikel behandling, og H & E farvning afslører et betydeligt fald i inflammatorisk celle infiltration i leverportal område af mus behandlet med sølv nanopartikler i forhold til kontrol.
Flow site og metrisk analyse viser tilstedeværelsen af betydeligt færre NK celler i leveren af sølv nanopartikel behandlede dyr sammenlignet med ubehandlede rhesus rotavirus inficerede mus. Yderligere immunhisemisk farvning afslører et væsentligt reduceret udtryk for NK cellemarkør farvning i portalen triade af sølv nanopartikel behandlede mus i forhold til rhesus rotavirus inficerede dyr. Mens du forsøger denne procedure, er det vigtigt at huske, at praksis vil give de bedste resultater.
Efter denne procedure, som metoder som konjugering sølv nanopartikler til andre ting kan udføres for at besvare yderligere spørgsmål om aktiviteten af læsioner i behandlinger af BA i musemodeller. er udvikling. Denne teknik gav en måde for forskere inden for gastroenterologi til BA eller andre sygdomme såsom kolestase i leveren.
Glem ikke, at arbejde med forskning rotavirus kan være yderst farligt, og dermed forholdsregler såsom at bære passende personlige værnemidler bør altid tages, når du udfører denne procedure.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
