Immunology and Infection
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
En sølv Nanoparticle metode for Ameliorating biliær Atresia syndrom i mus
Chapters
Summary October 13th, 2018
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Denne artikkelen beskriver i detalj en metode basert på silver nanopartikler for ameliorating biliær atresia syndrom i en eksperimentell biliær atresia musemodell. En solid forståelse av forberedelsesprosessen reagens og neonatal musen injeksjon teknikken vil hjelpe bli forskere med metoden som brukes i neonatal mus modell studier.
Transcript
Disse metodene kan bidra til å besvare viktige spørsmål i galle atresi. Av BA synspunkter om sykdom, patogenese og behandling. Den største fordelen med denne teknikken er at neonatal mus injeksjon teknikk vil hjelpe forskere til å bli kjent med metoden for andre neonatal mus modell studier.
Implikasjonene av denne teknikken strekker seg mot behandling av BA som flere nanopartikler av betydning Selv om denne metoden kan gi innsikt i BA-behandling, kan den også brukes på andre systemer som neonatal musemodeller av patogenesen av dette Generelt på den måten denne metoden vil fordi den lille størrelsen på neonatale mus kan resultere i bygging av injeksjonsprosessen. For å etablere biliær atresi i en musemodell, last rhesus rotovirus i en en en milliliter insulinsprøyte utstyrt med en 29-gauge nål, og intraperitoneally levere 1,2 ganger 10 til femte plakkdannende enheter av virus i 20 mikroliter av Dulbecco's Modified Eagle Medium til hver nyfødte innen 24 timer etter fødselen. Deretter returnerer nyfødte til sin mor for daglig overvåking og veiing.
Når neonatal dyrene begynner å vise tegn på gulsott, last en en milliliter sprøyte utstyrt med en 29-gauge nål med 50 mikroliter av nylaget sølv nanopartikkel kollagen løsning per dyr og bruke ringfingeren til å trykke benet på en gulsott dyr skråt over høyre lår. Sakte introdusere nålen i en 15 graders vinkel i bukhinnen, og ved å nå overflaten av den nedre kanten av leveren, injisere sølv nanopartikkel kollagen blandingen. Når hele blandingen er injisert, fjern nålen langsomt og la dyret hvile i ti minutter for å la kollagen stivne og for å hindre at moren slikker injeksjonsstedet.
Deretter returnerer musene til burene sine for daglig overvåking. På dag ni eller tolv etter inokulasjon steriliser du øvre og nedre del av magen med 75% etanol, og immobiliserer lemmer av en infisert mus. Åpne huden, muskelen og bukhinnen langs midtlinjen til xyphoid, og bruk en steril bomullspinne for å fjerne mage-tarmkanalen for å fullstendig eksponere membranen.
Sett nålen på en losset en milliliter insulinsprøyte inn i hjertets venstre ventrikkel, og trekk sprøytestempelet langsomt tilbake for å oppnå maksimalt blodvolum. Overfør blodet til et 1,5 milliliter rør i en 30 minutters inkubasjon ved romtemperatur og pellet de røde blodcellene ved sentrifugering. Deretter samler serumet for senere analyse.
For ekstrahepatisk kolangiografi, bruk en bomullspinne for å fullt ut utsette leveren, galleblæren og ekstrahepatiske gallekanaler. Etter å ha fotografert utseendet på lever- og gallekanalene under et dissekerende mikroskop, bruk oftalmiske pinsett for å forsiktig gripe bunnen av galleblæren og sakte sette nålen til en en milliliter sprøyte lastet med metylenblå oppløsning inn i galleblæren hulrom. Gripe nålen med tang, sakte infuse 10-20 mikroliter metylen blå.
Når fargestoffet passerer gjennom de ekstrahepatiske gallekanalene til jejunum, få et annet bilde av vevet. Deretter for hematoksylin og eosinfarging, høst leveren fra hvert dyr for overnattingfiksering i 10% formalin. Neste morgen, bygge inn prøvene i parafin for snitting, etterfulgt av de-voksing re-hydrering med en etanol serie og hematoksylin og eosin farging i henhold til standard histopatologiske analyseprotokoller.
Sammenlignet med ubehandlede galle atresi mus, sølv nanopartikkel behandlet dyr demonstrere redusert gulsott og opprettholde sin normale kroppsvekt. Nivåene av bilirubinmetabolisme og levertransaminase faller til normale kontrollverdier, noe som tyder på at sølvnanopartikler forbedrer leverfunksjonen betydelig. Ekstrahepatisk kolangiografi med metylenblå farging bekrefter gallegangspatency etter sølv nanopartikkelbehandling, og H&E farging avslører en betydelig reduksjon i inflammatorisk celleinfiltrasjon i leverportalområdet til mus behandlet med sølvnanopartikler sammenlignet med kontroller.
Flytstedet og beregningsanalyse indikerer tilstedeværelsen av betydelig færre NK-celler i leverene til sølvnanopartikkelbehandlede dyr sammenlignet med ubehandlede rhesus rotavirusinfiserte mus. Ytterligere immunohistokjemisk farging avslører et betydelig redusert uttrykk for NK cellemarkørfarging i portaltriaden av sølvnanopartikler behandlet mus sammenlignet med rhesus rotavirus infiserte dyr. Mens du prøver denne prosedyren, er det viktig å huske at praksis vil gi beste resultater.
Etter denne prosedyren, som metoder som konjugating sølv nanopartikler til andre ting kan utføres for å svare på flere spørsmål om aktiviteten til lesjoner i behandlinger av BA i musemodeller. er utvikling. Denne teknikken ga en måte for forskere innen gastroenterologi til BA eller andre sykdommer som kolestase i leveren.
Ikke glem at arbeid med forskning rotavirus kan være ekstremt farlig, og dermed forholdsregler som bruk av riktig personlig verneutstyr bør alltid tas når du utfører denne prosedyren.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
