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Il protocollo di sforzo delicato cronico imprevedibile per indurre anedonia in topi
Chapters
Summary October 24th, 2018
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Qui vi presentiamo il protocollo sforzo delicato cronico imprevedibile nei topi. Questo protocollo induce un fenotipo simile a depressione a lungo termine e permette di valutare l'efficacia degli antidepressivi putativi a invertire i deficit di tipo di depressiva comportamentistici e neuromolecular.
Transcript
Il principale vantaggio di questa tecnica è che traduce adeguatamente le principali caratteristiche neurobiologiche e comportamentali implicate nella patogenesi, nell'eziologia e nel trattamento della depressione. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nella comprensione della fisiopatologia dell'ansia e della depressione e promuovere lo sviluppo di nuovi trattamenti farmacologici. L'implicazione di questa tecnica si estende per la terapia della depressione, perché consente screening per potenziali antidepressivi mentre assomiglia al lungo corso di remissione evidente nei pazienti umani.
Inizia riempiendo le gabbie di casa con segatura fresca e aggiungi un pezzo di cotone idrofilo per l'arricchimento. Ospita gli animali nella gabbia di casa per un periodo di acclamazione di una settimana e mantieni un ciclo chiaro / scuro coerente di 12 ore. Consentire l'accesso ad libitum al chow e all'acqua dei roditori.
Progettare un regime di stressante di quattro settimane in cui ciascuno dei sette stressanti viene utilizzato una volta alla settimana, in un giorno diverso ogni settimana. Dopo una settimana di acclamazione, inizia l'applicazione degli stressanti sui topi di quattro settimane nella stanza UCMS. Per il primo stressante, metti i topi insieme alle loro controparti in gabbia domestica in una gabbia vuota.
Riempire la gabbia vuota con acqua mantenuta a 24 gradi Celsius più o meno-uno a una profondità di un centimetro e tenere i topi nella gabbia bagnata per quattro ore. Quindi trasferire ogni mouse in una gabbia di essiccazione transitoria individuale separata con una lampada termica sopra di esso, un tappetino riscaldante sotto di esso e biancheria da letto per tovaglioli di carta. Posizionare un termometro nella gabbia transitoria per verificare che la temperatura non superi i 37 gradi Celsius.
Tenere ogni topo nella gabbia transitoria fino a quando non è asciutto e sembra rinvigorito, quindi riportare i topi nella gabbia di casa con le stesse controparti. Per la segatura inumidita, acqua povera mantenuta a 24 gradi Celsius più o meno uno nella gabbia di casa fino a quando la segatura non viene moderatamente smorzata. Dopo quattro ore, asciugare i topi in gabbie transitori.
Quindi posizionare i topi con controparti in gabbia domestica in una gabbia sterile con segatura fresca. Per il prossimo stressante, inclinare la gabbia a 45 gradi contro il muro per quattro ore. Per Empty Cage, trasferisci tutti e cinque i topi insieme alle loro controparti specifiche della gabbia domestica dalla gabbia domestica in una gabbia vuota per quattro ore.
Per il quinto stressante, trasferire i topi insieme alle loro controparti specifiche della gabbia domestica dalla gabbia domestica a una gabbia che è stata ospitata da un gruppo diverso di topi per un periodo di almeno tre giorni prima dell'applicazione dello stressante. Tieni i topi nella gabbia sconosciuta per quattro ore. Per il sesto stressante, posizionare ogni mouse separatamente in un limitatore di mouse pulito per quattro ore.
Successivamente, riportare i topi nella gabbia di casa con le stesse controparti. Per l'ultimo stressante, trasferire i topi nella gabbia domestica con le loro controparti specifiche nella stanza UCMS. Tieni la luce per 24 ore consecutive.
Infine, dopo l'applicazione dello stressante, riportare le gabbie del gruppo UCMS dalla stanza UCMS alla stanza degli alloggi. Durante le quattro settimane di esposizione allo stress, mantenere il gruppo ingenuo nelle loro gabbie di casa situate nella stanza degli alloggi. Il giorno successivo alla cessazione del protocollo UCMS, iniziare la somministrazione di agenti farmacologici terapeutici putativi.
Dopo la fase di trattamento, rimuovere ogni topo dalla gabbia di casa e posizionare singolarmente in una gabbia piena di segatura fresca e un pezzo di cotone idrofilo per l'arricchimento. Quindi preparare due bottiglie, una con acqua distillata e un'altra con soluzione di saccarosio al 2%. Pesare le due bottiglie e fissarle ad entrambe le estremità del coperchio della gabbia e posizionare il chow dei roditori tra le due bottiglie per consentire ai topi l'accesso ad libitum sia alle soluzioni che al cibo per un periodo di 24, 48, 72 o 144 ore.
Dopo 12 ore, o una volta al giorno se la durata del test supera le 24 ore, pesare le bottiglie per stimare il consumo da ogni bottiglia e cambiare le posizioni degli ugelli per controbilanciare la possibilità che i risultati siano stati confusi dalla preferenza di posizione. Infine, pesare le bottiglie ogni giorno per stimare il consumo da ogni bottiglia. Il gruppo UCMS ha dimostrato una diminuzione della preferenza per il saccarosio rispetto al gruppo ingenuo, suggerendo che il protocollo UCMS fosse efficace nell'indurre l'anedonia.
Inoltre, il gruppo UCMS ha dimostrato una diminuzione dei livelli di BDNF ippocampale rispetto al gruppo ingenuo, suggerendo che il protocollo UCMS ha portato alla diminuzione dei livelli di BDNF ippocampale come evidente nella depressione umana. I risultati hanno indicato che il gruppo salino UCMS ha mostrato una significativa diminuzione della preferenza per il saccarosio rispetto al gruppo salino ingenuo, nonché rispetto ai gruppi UCMS escitalopram e UCMS NHT, suggerendo che sia l'escitalopram che l'NHT hanno normalizzato l'anedonia indotta dall'UCMS. Inoltre, il gruppo salino UCMS ha dimostrato una diminuzione dei livelli di BDNF ippocampale rispetto al gruppo salino ingenuo e rispetto sia all'escitalopram UCMS che ai gruppi UCMS NHT, suggerendo che sia l'escitalopram che l'NHT hanno normalizzato la riduzione indotta dall'UCMS nei livelli di BDNF nell'ippocampo.
Seguendo questa procedura, è possibile eseguire altri metodi come il test di sospensione della coda, il test di nuoto forzato e il plus-laze elevato. Questi test sono usati per valutare la disperazione comportamentale e il comportamento esplorativo e ansieo.
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