Geçerli kalp doku mühendisliği amacı değiştirebilir veya yapısı ve fonksiyonu yaralı miyokard doku1tamir için bir terapi geliştirmektir. 3-b kalp doku modelleri yerli kalp dokusunun önemli contractile ve elektrofizyolojik özellikleri sergileyen oluşturmak için yöntem hızla2,3genişletilmesi. Çeşitli stratejileri keşfedilmeyi ve çalışmalar4,5' te kullanılan. Bu yöntemler belirli sentetik ve doğal biyoaktif hydrogels, jelatin, kolajen, fibrin ve peptidler6gibi kullanımı ile arasındadır biyo-mürekkep ifade teknolojileri2 ve bioprinting teknolojileri7.
Bu iskele ücretsiz yöntemleri yabancı iskele malzeme8birleşmeyle dezavantajları olmadan biomaterial tabanlı yöntemi olarak karşılaştırılabilir doku üretebilir gösterilmiştir. Oren Caspi vd. , hücre türleri ortaklığın son derece bozukluklarına insan mühendislik kalp dokusu9nesil sağlar gösterdi. Çene ve ark. pulcuklarının kardiyak yama oluşturulması için 3-b bir yazdırma yöntemi geliştirdi. Sonuçta ortaya çıkan yamalar cardiomyocytes, fibroblastlar ve 70:15:15 oranı10endotel hücreleri oluşur. Pulcuklarının etkili "yapı taşları" İskele ücretsiz kalp doku yaratılış olarak onlar hipoksi karşı dirençli olması ve yeterli mekanik bütünlük implantasyon11,12sahip gösterilmiştir. Önceki çalışmalarda küresel oluşturmak için çeşitli imalat yöntemleri göstermiştir, idam kullanımı da dahil olmak üzere bırakma yöntemi, spinner şişeler13, mikrosıvısal sistemleri14ve yapışık olmayan kültür yüzeyler kaplamasız veya ile kaplı özel mikro-kalıpları15. Bu protokol için kullandığımız asılı pulcuklarının yüzlerce aynı anda yoğuşmalı için micropores içeren açılan aygıt.
Bu çalışmada bir roman ve el ile bir kare kalıp boşluğuna pulcuklarının tohum ve olgunlaşma için doku üzerinde bir shaker kuluçka içerir kalp doku oluşturmak için verimli iskele ücretsiz yöntemi sunar. Her zamanki gibi statik kültür koşullar altında oksijen difüzyon dış yönleri merkezi nekroz kaynaklanan doku yapısı ile sınırlıdır. Ancak, net kalıp ile medya için besin ve oksijen difüzyon artan sağlayan bir sürekli sıvı hareket ile kalıp içine seribaşı pulcuklarının daldırılır. Ayrıca, bu kalıp tabanlı yöntem farklı boyutta doku yamalar en az el ile çaba ile eşzamanlı oluşturulması için izin verir ve sonuç doku kalıptan kolayca kaldırılabilir. Bu roman yöntemi iskele-free, çok katmanlı kardiyak yamalar verimli ve tekrarlanabilir oluşturulması için izin verir.
Bu protokol, iskelesiz kardiyak doku oluşturma için bir araç olarak sferoidleri kullanan, üç boyutlu kardiyak doku oluşturma için yeni ve kolay küf tabanlı bir yöntemi tanımlar. Deneylerimizde, insan kaynaklı pluripotent kök hücre kaynaklı kardiyomiyositler, insan kardiyak fibroblastları ve insan göbek veni endotel hücreleri olmak üzere üç tip hücre izole edildi ve bir hücre süspansiyonu oluşturmak için kullanıldı. 50 ML'lik konik bir tüpte% 70 kardiyomiyositler,% 15 fibroblastlar ve% 15 endotel hücreleri ile.
Daha sonra hücre süspansiyonunu, üç gün sonra yüzlerce çırpıcı sferoidin kendiliğinden oluşumuna neden olacak olan ultra düşük bağlantılı asılı bir damla sisteminin her bir oyuğuna dağıtıyoruz. Sferoidler daha sonra toplanır ve yeni bir kalıp boşluğuna oturtulur. Doku daha sonra birkaç gün boyunca inkübatördeki bir çalkalayıcı üzerinde orta dereceli steril bir kapta tutulur.
Kalıp daha sonra çıkarılır ve mekanik bütünlüğe sahip iskelesiz bir doku yaması ile sonuçlanır. Asılı bırakma cihazı, her biri 350 mikron çapında 850 mikro gözenekli yeniden kullanılabilir, ultra düşük bir bağlantı kuyusudur. Asılı damla, standart altı kuyulu plakalarla uyumludur.
Hücre süspansiyonunu yaptık