裏打ちクリア: 組織の脂肪組織の三次元イメージング法をクリア

最近まで、脂肪組織は、脂肪細胞の非晶質のコレクションとしての考案されました。過去数十年間は、我々 の理解は脂肪の脂肪細胞と脂肪細胞の前駆物質の種類、免疫細胞、線維芽細胞、血管、および神経投射を含む複雑な器官であると認め今より洗練されたきました。これらの居住者の脂肪細胞間の相互作用は、脂肪組織と個体の生理学と病態生理学¹に及ぼす影響を発音しています。新興の研究は、特定の相互作用の基礎となる重要な分子メカニズムを解明している、信頼性の高い構造プロファイリング 3 次元 (3 D) で全体の組織のより包括的な理解が必要です。

脂肪組織の形態の私達の現在の知識は薄いセクション (5 μ m) を比較的高倍率 (10 倍以上) の組織学的分析に基づいて^2,3。ただし、この方法には、いくつかの重要な制限があります。交感神経や血管、脂肪関数^4,5,6,7で重要な役割を再生する知られているなどまず、複雑な糸状構造が評価することは困難薄いセクションで。第二に、その一見アモルファス形状とに集中する代表的な構造の単位の不足、セクション染色のみに基づいて脂肪組織構造を理解することは困難です。第三に、脂肪組織が 3 D 解剖学的再建、従来の全脳形態⁸を研究するために使用に適した一貫性のある連続切片を得ることに課題を作成する、非常に高い脂質含量です。これらの要因を考えると、携帯電話の解像度を実現しながら全体の脂肪デポの 3次元可視化を提供することができますマウント全体アプローチのための大きい必要性があります。

臓器全体の体積の 3 D イメージングによる光の拡散効果のあいまいに挑戦しています。生体内光散乱の主な原因は、脂質水溶液の界面から来ています。脂質を除去することによって散乱を除去するために努力は、世紀以上にわたっての継続されていますが、最近の技術革新の⁹の数が多いがありました。そのような新しく開発された組織のクリア メソッドは溶媒消去臓器の反応が有効な 3 D イメージング (iDISCO/iDISCO +)^10,11。ただし、脂肪組織が脂質の高レベルを与えられた特定の課題を提示し、したがって、iDISCO に修正を加える/iDISCO + プロトコルは完全に崩壊から組織を保護しながら脂質を抽出するために必要な。裏打ち-クリアと呼ばれる、開発した修正されたプロトコルでは、高分解能体積画像¹²に適した最適な透明度を達成するために脂肪の脱脂をメタノール/ジクロロ メタン ベースを採用しています。脱脂は、GFP や RFP など主として内生表現渇き蛍光タンパク質ステップので、そのようなタンパク質の可視化は、反応によって達成されなければなりません。全体的にみて、このシンプルで堅牢なプロトコルは居住者の脂肪細胞の組織レベルの組織を研究に適用できる脂肪細胞の前駆細胞と脂肪の形態の開発中にトレースする血統。