ADIPO ясно: Ткани, очистка метод для трехмерных изображений жировой ткани

До недавнего времени, жировой ткани был задуман как аморфный коллекции жировых клеток. За последние несколько десятилетий наше понимание выросло более сложные, с жиром, теперь признается сложный орган, содержащих различные типы адипоциты, а также Адипоцит прекурсоров, иммунных клеток, фибробластов, сосудистую и нерва прогнозы. Взаимодействие между эти клетки жировой резидентов произнесли воздействие на научные физиологии и патофизиологии¹и жировой ткани. Хотя новые исследования разгадана важные молекулярные механизмы, лежащие в основе некоторых взаимодействия, более полное понимание требует надежных структурных профилирования всей ткани в трех измерениях (3D).

Наши текущие знания о морфологии жировой ткани во многом основывается на гистологический анализ тонких секций (5 мкм) с относительно высокого увеличения изображений (более чем 10 X)^2,3. Однако этот подход имеет несколько существенных ограничений. Во-первых, замысловатые нитевидные структуры, такие как симпатические нервы и сосудистую, которые, как известно, играют важную роль в жировой функция^4,5,6,7, трудно оценить через тонкие разделы. Во-вторых благодаря его казалось бы аморфной форме и отсутствие представителей структурных подразделений сосредоточиться на, трудно оценить жировой ткани структуры, основанные только на раздел пятнать. В-третьих жировая ткань имеет содержание очень высоким липидов, создавая проблемы в получении последовательной серийный секций, которые подходят для 3D анатомические реконструкции, традиционным методом, используется для изучения морфологии весь мозг⁸. Учитывая эти факторы, существует большая потребность в целом гора подход, который может обеспечить 3D визуализация всего жировых депо по-прежнему достигая сотовой резолюции.

3D объемного изображения всего органа является сложной задачей вследствие сокрытия эффекта рассеивания света. Основным источником рассеяние света в биологических тканях происходит от липидов водный интерфейсов. Хотя усилия по ликвидации разброса, удалив липиды были постоянной для более века, было большое количество последних инноваций⁹. Один из таких недавно разработанный метод ткани очистка является immunolabeling с поддержкой 3D визуализации растворителя очищены органов (iDISCO / iDISCO +)^10,11. Однако, жировой ткани представляет собой особую проблему, учитывая ее высокий уровень липидов и, следовательно, дополнительные изменения в iDISCO / iDISCO + протокола обязаны полностью извлечь липиды защищая ткани от разрушения. Измененный Протокол, которую мы разработали, теперь называется Adipo-ясно, работают на основе метанол/дихлорметан delipidation жировой ткани для достижения оптимальной транспарентности подходит для высокого разрешения объемных изображений¹². Потому что delipidation шаг во многом утоляет эндогенно выразил флуоресцентные белки, например GFP и ППП, визуализации таких белков должна быть достигнута путем immunolabeling. В целом, это простой и надежный протокол могут быть применены для изучения тканевом уровне Организации клеток жировой резидент, трассировки линии Адипоцит прогениторных клеток и жировой морфогенеза во время разработки.