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Behavior

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Aprendizagem avançada stress medo, um modelo robusto de roedor do transtorno de estresse pós-traumático

Behavioral and Locomotor Measurements Using an Open Field Activity Monitoring System for Skeletal Muscle Diseases

Journal (Behavior)

Behavioral and Locomotor Measurements Using an Open Field Activity Monitoring System for Skeletal Muscle Diseases

Early Metamorphic Insertion Technology for Insect Flight Behavior Monitoring

Journal (Behavior)

Early Metamorphic Insertion Technology for Insect Flight Behavior Monitoring

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Aprendizagem avançada stress medo, um modelo robusto de roedor do transtorno de estresse pós-traumático

Article DOI: 10.3791/58306

October 13th, 2018 •

Abha K. Rajbhandari^1,2, Sarah T. Gonzalez^1,2, Michael S. Fanselow^1,2,3

¹Department of Psychology, University of California, Los Angeles, ²Staglin Center for Brain and Behavioral Health, University of California, Los Angeles, ³Department of Psychiatry and Biobehavioral Sciences, University of California, Los Angeles

Chapters

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October 13th, 2018

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Aqui descrevemos a metodologia detalhada necessária para realizar experiências de aprendizagem (Autoprodutores) medo stress avançado, um modelo pré-clínicos de transtorno de estresse pós-traumático, em ratos e camundongos. O modelo utiliza aspectos do pavloviano medo condicionado e congelar-se como um índice do medo reforçado em roedores.

Transcript

Esse método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo da neurociência comportamental, como como entender melhor os mecanismos biológicos subjacentes do TEPT. A principal vantagem dessa técnica é que ela é robusta, confiável, quantitativa, e pode ser realizada em várias espécies. Comece criando um conjunto de câmaras de condicionamento do medo para servir como contexto A, e um segundo conjunto de câmaras de condicionamento do medo para servir como contexto B.Coloque cada câmara de condicionamento do medo dentro de um cubículo atenuante de som para evitar a intrusão de ruído externo.

Em seguida, coloque os pisos da grade em cada câmara de condicionamento do medo para a entrega de choque de pé, usando um padrão de grade diferente para cada contexto para diferenciar a textura do piso entre os contextos. Em seguida, coloque as pastilhas triangulares de plexiglass preto no contexto B para diferenciar o layout interno dos dois contextos. Limpe as paredes e portas da câmara e pulverize as panelas sob os pisos da grade com uma solução de limpeza diluída.

Depois que o piso da rede for limpo, conecte um gerador de choque e um embaralhador capaz de fornecer um choque de amplitude de 1 miliamp ou menor em cada piso da grade para entrega de choque no pé. Por fim, use um multímetro para testar a corrente que está sendo fornecida pelo gerador de choque colocando cada sonda em uma barra diferente do piso da grade, e confirmando que a amplitude de choque desejada é produzida. No primeiro dia, configure o contexto A com pisos de grade e luz visível.

Certifique-se de que o multimetro está ligado a diferentes barras para confirmar a amplitude de choque desejada. Transportar animais do vivarium para a sala experimental em suas gaiolas de origem colocadas em uma carroça, e colocar individualmente nas quatro câmaras de condicionamento do medo. Para experimentos com camundongos, use o gerador de choque e os embaralhadores para entregar 10 choques de pé de um miliamp apresentados aleatoriamente ao longo de 60 minutos através dos pisos da grade das câmaras contendo indivíduos condicionados ao trauma.

Para experimentos com ratos, use o gerador de choque e os embaralhadores para entregar 15 choques de pé de um miliamp apresentados aleatoriamente ao longo de 90 minutos através das barras de grade das câmaras contendo indivíduos condicionados ao trauma. Após 90 minutos para o rato, ou 60 minutos para os experimentos do rato, devolva todos os animais para suas gaiolas domésticas e prontamente retorne ao vivarium. No segundo dia, configure o contexto A e transporte de animais para a sala experimental como feito no primeiro dia.

Coloque os animais no contexto A por oito minutos, sem entrega de choque, e o vídeo grave o comportamento durante toda a sessão. Após oito minutos, devolva todos os animais para suas gaiolas e retorne prontamente ao vivarium. No terceiro dia, configure o contexto B com um conjunto diferente de pisos de grade dos usados no contexto A e inserções de plexiglass curvo triangular ou branco preto.

Use luz infravermelha ou infravermelha próxima, se necessário, para iluminar as câmaras e verifique a amplitude de choque com o multímetro. Limpe as câmaras e pulverize as panelas sob os pisos da grade com a solução não utilizada no contexto A.Next, transporte animais do vivarium para a sala experimental em uma banheira de plástico preto, e coloque-os individualmente em câmaras de condicionamento do medo. Depois de um período de 180 segundos de linha de base, entregue um único segundo, um choque de pé miliamp para ratos, ou um único segundo, um choque de pé miliamp para ratos, para todos os animais.

Em seguida, remova todos os animais 30 segundos após o parto do choque e retorne prontamente ao vivarium. No quarto dia do procedimento, configure o contexto B como feito no terceiro dia. Transporte de animais do vivarium para a sala experimental no mesmo transporte que feito no terceiro dia.

Coloque os animais no contexto B por oito minutos sem entrega de choque, e o registro de vídeo congele durante toda a sessão. Por fim, remova todos os animais após oito minutos e retorne prontamente ao vivarium. Os resultados indicam que os animais em condição de trauma apresentaram níveis significativamente maiores de congelamento no contexto A em comparação com os controles de não trauma, indicando aquisição de medo ao contexto do trauma.

Tanto o trauma quanto nenhum animal de trauma apresentaram níveis mínimos de congelamento que não diferem um do outro. Além disso, os animais de trauma apresentaram menor reatividade de choque em comparação com os não controles de trauma, e os animais de trauma apresentaram maior congelamento em comparação com os controles de trauma, indicando que a exposição ao estresse traumático aumentou o medo imediatamente após o leve estressor. Após este procedimento, outros métodos como o labirinto mais elevado, campo aberto e caixa escura-clara podem ser realizados a fim de responder a perguntas adicionais como como o trauma afeta fenótipos semelhantes à ansiedade.

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