لوحة الفلورة تعدد الإرسال الآلي للدراسات المناعية-علم الأورام في عينات الأنسجة الكبدية الفورمالين--ثابت

إيمونوبروفيلينج تحليل عينات الأنسجة FFPE الورم قد أصبح عنصرا أساسيا في الدراسات المناعية-الأورام، خاصة بالنسبة لاكتشاف والتحقق من صحة رواية المؤشرات الحيوية التنبؤية للسرطان العلاج المناعي في سياق التجارب السريرية^{1 ،2}. يبقى المدينة اللونية، تشروموجينس الكيميائية مثل ديامينوبينزيديني، باستخدام تقنية قياسية في تشخيص الأمراض إيمونولابيلينج من الأنسجة خزعة³. المدينة الموحدة يمكن أن تستخدم أيضا لسرطان الأنسجة إيمونوبروفيلينج، بما في ذلك كوانتيتيشن من الفئات السكانية الفرعية من الخلايا المرتبطة بالأورام الليمفاوية، وتقييم مستويات التعبير من نقاط التفتيش المناعي مثل يجند موت الخلية المبرمج 1 (PD-L1)^{4 ،5}. المدينة الموحدة محدودة، ومع ذلك، في أن يمكن أن يكون المسمى مستضد واحد فقط كل قسم الأنسجة. لأنه عادة ما تتطلب دراسات إيمونوبروفيلينج تحليل التعبير مجتمعة من عدة علامات، سيتطلب استخدام المدينة الموحدة تلطيخ لمقاطع متعددة من الأنسجة، وكل ملطخة بعلامة واحدة، و، ولذلك، سيكون محدودة إلى حد كبير لتحليل عينات الأنسجة الصغيرة مثل الأساسية إبرة الخزعات. طرق المدينة القياسية أيضا محدودة لتقييم العلامات التي يتم كويكسبريسيد عن الخلية متنوعة من السكان، كما شائع مع علامات الحاجز المناعي مثل PD-L1، التي يعبر عنها بالضامة المرتبطة بالورم والخلايا السرطانية. أبلغ هذا القيد في، على سبيل المثال، استخدام معيار مونوبليكس المدينة من أخصائيي علم الأمراض للتحليل الكمي لعلامة المدينة أعرب عنها الخلية مختلف أنواع⁶. تطوير تقنيات المدينة اللونية متعدد توظيف تشروموجينس الملونة المتنوعة على نفسه يمثل قسم الأنسجة النهوض على الأسلوب القياسي مونوبليكس المدينة،⁷ على الرغم من أنها تظل محدودة إيمونولابيلينج لعدد قليل علامات، ويقدم أيضا التحديات تقنية هامة للتقييم السليم لعلامات المعرب عنها في المقصورات سوبسيلولار نفس السكان الخلية نفسها.

المحاذير المذكورة أعلاه فيما يتعلق بتوافر الأنسجة من العينات السريرية، فضلا عن القيود المفروضة على تقنيات المدينة اللونية المتعددة، قد أدت إلى الحاجة إلى تطوير تحسين طرائق متعدد للدراسات المناعية-الأورام استناداً إلى وضع العلامات الفلورية جنبا إلى جنب مع التصوير النظم التي يمكن فعلياً فصل إشارات فلوروفوريس متعددة من نفس الشريحة. واحد مثل هذا الأسلوب يستند إلى تضخيم إشارة تيراميدي (TSA) جنبا إلى جنب مع تصوير مجهرية متعددة الأطياف للون كفاءة الفصل⁸. توظف مجموعة متاحة تجارياً على أساس حساب السياحة الفرعي فلوروفوريس الأمثل ل التصوير المتعدد الأطياف⁸ (انظر الجدول للمواد). ميزة هامة من هذا النظام هو توافقه مع نفس الأجسام المضادة الأولية غير مسمى التي تم التحقق من صحتها والأمثل لمعيار اللونية المدينة^9،،من¹⁰¹¹. وهذا ما يسمح أسرع الأمثل ليس فقط ولكن أيضا المرونة في التعديلات الأمثل ولوحة تتضمن أهدافا جديدة. وعلاوة على ذلك، يمكن أن يكون الأمثل طريقة حساب السياحة الفرعي الفلورة متعدد (mIF) المتاحة تجارياً الآلي المدينة الملطخ بالأنظمة، مما يسمح لنقل مباشر من مونوبليكس المدينة اللونية للقوة المتعددة الجنسيات.

نقدم هنا بروتوكولا لفريق القوة المؤقتة المتعددة الجنسيات للدراسات المناعية-الأورام يستند الآلي صبغة mIF حساب السياحة الفرعي ويستخدم ماسح المتعدد الأطياف للتصوير. هذا البروتوكول يمكن تكييفها وتعديلها بواسطة أي مستخدم المختبر مع الوصول إلى وصف الأجهزة والمواد الكاشفة. يشمل البروتوكول فريق من ستة أجسام الأولية إيمونوبروفيلينج من الأورام السرطانية: PD-L1، PD-1، CD68 (كعلامة بلعم عموم)، CD8 (خلايا T-السامة للخلايا)، كي-67، و AE1/AE3 (pan-سيتوكيراتين، تستخدم كعلامة الظهارية للتعرف على سرطان خلايا). دراسة حديثة توضح الاستفادة المثلى من بروتوكول mIF إدارة أمن النقل اليدوي باستخدام المدينة اللونية كمرجع قياسي للتحقق من صحة متعدد تلطيخ¹². قد وضعت طريقة تحديث المعروضة هنا باستخدام مجموعة حساب السياحة الفرعي المتاحة تجارياً، وسبعة ألوان محسنة في الملطخ الآلي، تقصير الوقت المصبوغة من 3 – 5 أيام إلى ح 14، بينما أيضا تحسين اتساق تلطيخ جذريا. بالإضافة إلى البروتوكول الرئيسية المفصلة المقدمة هنا، يتضمن قسم المواد التكميلية الأسلوب "إسقاط السيطرة"، عملية مراقبة نوعية إضافية لتقييم لوحة mIF جديدة، فضلا عن الملاحظات الفنية للتحسين، استكشاف الأخطاء وإصلاحها، والتنمية من جديد الألواح المتعددة لمساعدة المستخدم على مختبر لإعداد وتحسين طريقة حساب السياحة الفرعي mIF mIF مخصصة لوحات.