Immunoprofiling analiz FFPE tümör doku örnekleri IMMUNO-Onkoloji çalışmaları, keşif ve Roman akıllı biyolojik kanserli hastalarda klinik^{1 bağlamında için doğrulama için özellikle önemli bir bileşeni haline gelmiştir} ^,². Diaminobenzidine gibi kimyasal chromogens kullanarak chromogenic IHC standart tekniği biyopsi doku³immunolabeling için tanılama patoloji kalır. Standart IHC Nefelometri tümör ilişkili lenfosit altgrupları ve değerlendirme (PD-L1)^{4 programlı hücre ölümü ligand 1 gibi bağışıklık denetim noktaları ifade düzeylerinin de dahil olmak üzere kanser dokusu immunoprofiling için de kullanılabilir.} ^,⁵. Standart IHC ancak, içinde tek bir antijen doku bölüm başına etiketli sınırlıdır. İmmunoprofiling çalışmalar genellikle birkaç işaretleri kombine ifade analizini gerektirdiği için standart IHC kullanımı birden fazla doku bölümlerini boyama gerektirir, her tek bir marker ile lekeli ve bu nedenle, olur önemli ölçüde küçük doku örnekleri gibi çekirdek iğne biyopsileri analizi için sınırlı. Standart IHC yöntemleri de farklı hücre popülasyonlarının, PD-L1, tümör ilişkili makrofajlar ve kanser hücreleri tarafından ifade edildiği gibi bağışıklık denetim noktası işaretçileri olan ortak olduğu gibi tarafından coexpressed işaretleri değerlendirilmesi için sınırlıdır. Bu sınırlama standart monoplex IHC kullanımı, örneğin, farklı hücre türleri⁶tarafından ifade edilen bir IHC işaretleyici Nicel analiz patologlar tarafından bildirilmiştir. Her ne kadar onlar kalır aynı doku bölümü temsil üzerinde çeşitli renkli chromogens standart IHC monoplex yöntemi,⁷ üzerinde bir gelişme istihdam multiplex chromogenic IHC yöntemlerin geliştirilmesi sayesinde, sadece bir kaç immunolabeling tarafından sınırlı işaretleri ve ayrıca aynı hücre popülasyonlarının aynı hücre altı bölmeleri içinde ifade işaretleri doğru değerlendirme için önemli bir teknik sorun mevcut.

Doku kullanılabilirlik klinik örnekleri yanı sıra multiplex chromogenic IHC teknikleri, sınırlamaları ile ilgili olarak yukarıda belirtilen uyarılar artış dayalı IMMUNO-Onkoloji çalışmaları için gelişmiş çok katmanlı yöntemler geliştirmek gerek verilen hiç Floresan etiketleme etkin bir şekilde birden fazla fluorophores sinyalleri aynı slayttan ayırabilirsiniz sistemleri Imaging ile birlikte. Böyle bir tekniği spektral mikroskobu görüntüleme için verimli renk ayrımı⁸ile birlikte tyramide sinyal güçlendirme (TSA) temel alır. Piyasada bulunan bir TSA tabanlı kiti spektral görüntüleme⁸ için en iyi duruma getirilmiş fluorophores istihdam ( Tablo malzemelerigörmek). Bu sistem bir kritik zaten doğrulanmış ve standart chromogenic IHC⁹^,¹⁰^,¹¹için en iyi duruma getirilmiş aynı etiketlenmemiş birincil antikorlar ile uyumluluk avantajdır. Bu yeni hedefler birleştiren en iyi duruma getirme ve panel değişiklikleri sadece daha hızlı optimizasyonu aynı zamanda esneklik sağlar. Ayrıca, multiplex ayirt (mIF) TSA yöntemi bırakmak monoplex basit bir transfer için piyasada bulunan otomatik IHC stainer sistemler için optimize edilebilir chromogenic IHC Finans Yüksek Lisans için.

Burada temel IMMUNO-Onkoloji çalışmalar için bir MIF panel MIF TSA boyama otomatik ve görüntüleme için spektral bir tarayıcı kullanan bir iletişim kuralı mevcut. Bu iletişim kuralı uyarlanmış ve açıklanan araçları ve Kimyasalları erişimi olan herhangi bir laboratuvar Kullanıcı tarafından değiştirilebilir. Protokol karsinomlar immunoprofiling için altı birincil antikorların bir panel içerir: PD-L1, PD-1, CD68 (olarak bir pan-makrofaj marker), CD8 (sitotoksik T hücreleri), Ki-67 ve AE1/AE3 (pan-cytokeratin epitel bir işaretleyici tanımlanması için kullanılan, Karsinomu Hücre). Yeni yapılan bir çalışmada¹²boyama multiplex doğrulamak için standart bir başvuru olarak chromogenic IHC kullanarak el ile bir TSA MIF protokol optimizasyon açıklar. Güncellenme Zamanı yöntemi burada sunulan büyük ölçüde kısaltılması da boyama tutarlılığını geliştirirken boyama zaman 3-5 gün 14 h, otomatik bir yapıcısı içinde en iyi duruma getirilmiş bir piyasada, yedi renkli TSA kiti kullanılarak geliştirilmiştir. Burada sunulan ayrıntılı ana protokolüne ek olarak bir Ek malzeme kısım "damla-control" yöntemi, yeni bir MIF panel yanı sıra optimizasyonu için teknik notlar değerlendirmek için bir ek kalite kontrol süreci içerir, sorun giderme ve laboratuvar Kullanıcı ayarlamak ve MIF TSA Yöntem özelleştirilmiş MIF panelleri için en iyi duruma getirmek için yardımcı olmak için yeni çok katmanlı paneller geliştirilmesi.

IMMUNO-Onkoloji araştırmalar Formalin sabit Karsinomu doku örnekleri Multiplex ayirt Panel otomatik