تحليل للتشوهات التي يسببها بيتا-اميلويد فيبرينوجين جلطة هيكل بالتحليل الطيفي، وفحص المجهر الإلكتروني

مرض الزهايمر (AD)، مرض الأعصاب مما يؤدي إلى التدهور المعرفي في المرضى المسنين، يغلب عليها الطابع ينبع من التعبير (Aβ) بيتا-اميلويد الشاذ والتجميع والتخليص البصر أدى إلى تسمم^{1، 2}-على الرغم من الرابطة تميز جيدا بين المجاميع Aβ والإعلان³، الآليات الدقيقة الكامنة وراء باثولوجيا المرض ليست مفهومة جيدا⁴. تزايد الأدلة تقترح أن العجز neurovascular تلعب دوراً في تطور وشدة⁵من الإعلان، كما Aβ تتفاعل مباشرة مع مكونات نظام الدورة الدموية⁶. وقد Aβ إلى تفاعل عالية تقارب مع الفيبرينوجين^7،8، الذي يموضع أيضا رواسب Aβ المرضى الإعلانية والماوس نماذج^9،،من¹⁰¹¹. وعلاوة على ذلك، يدفع التفاعل Aβ-الفيبرينوجين تشكيل جلطة فيبرينوجين الشاذ والهيكل، فضلا عن مقاومة فيبرينوليسيس^9،12. أحد الاحتمالات العلاجية في علاج الإعلانية، هو التخفيف من حدة العجز في الدورة الدموية عن طريق تثبيط التفاعل بين^13،Aβ والفيبرينوجين¹⁴. ولذلك، حددنا عدة مركبات الصغيرة التي تعوق التفاعل Aβ-الفيبرينوجين باستخدام فحص إنتاجية عالية والكيمياء الطبية النهج^13،14. لاختبار فعالية مثبطات التفاعل Aβ-الفيبرينوجين، نحن الأمثل طريقتين للتحليل في المختبر فيبرينوجين جلطة تشكيل: تجلط التعكر المقايسة، وفحص المجهر الإلكتروني (SEM)¹⁴.

تجلط التعكر المقايسة أسلوب مستقيم إلى الأمام والسريع لرصد فيبرينوجين جلطة تكوين باستخدام مطيافية الأشعة فوق البنفسجية-المرئية. متزايدة مبعثرة تجلط فيبرينوجين أشكال، الخفيفة ويزيد من التعكر للحل. على العكس من ذلك، عندما Aβ غير موجود، يتم تغيير هيكل تجلط فيبرينوجين، وتقليل التعكر المخلوط (الشكل 1). ويمكن تقييم تأثير المركبات المثبطة لإمكانية استعادة التعكر جلطة من التشوهات الناجمة عن Aβ. حين المقايسة التعكر يسمح للتحليل السريع لظروف متعددة، فإنه يوفر معلومات محدودة عن تجلط الشكل والهيكل. ووزارة شؤون المرأة، التي كشفت طبوغرافية الأجسام الصلبة بمسبار الإلكترون، يسمح بتحليل بنية ثلاثية الأبعاد بجلطة^15،16،،من¹⁷¹⁸ وتقييم كيفية وجود Aβ و المركبات المثبطة أو يغير هذا الهيكل^9،14. كل قياس الطيف الكتلي ووزارة شؤون المرأة هي التقنيات المختبرية الكلاسيكية التي استخدمت لأغراض مختلفة، على سبيل المثال، كانت تستخدم لرصد تراكم اميلويد^19،20. وبالمثل، يستخدم أيضا وزارة شؤون المرأة لتحليل فيبرينوجين جلطة تكونت من البلازما من مرض الزهايمر، باركنسون والسكتة الدماغية انصماميه المرضى^21،،من²²²³. البروتوكولات المقدمة هنا هي الأمثل لتقييم تكوين فيبرينوجين جلطة بطريقة سريعة واستنساخه.

ويوفر البروتوكول التالي التعليمات الخاصة بإعداد في المختبر فيبرينوجين-كلوت على حد سواء مع ودون Aβ. أنها أيضا تفاصيل أساليب لتحليل تأثير Aβ على تشكيل جلطة فيبرينوجين والهيكل. هو أظهرت فعالية هاتين الطريقتين لقياس تثبيط التفاعل Aβ-الفيبرينوجين باستخدام مؤشر التجارة والتنمية-2760، مجمع مثبطة صغيرة¹⁴. هذه الأساليب، كل على حدة ومعا، تسمح بتحليل في المختبر فيبرينوجين جلطة تشكيل سريع ومباشر.