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Uma purificação e ensaio de atividade In Vitro para um ppGpp (p) sintetase de Clostridium difficile
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Chapters
- 00:04Title
- 00:44Protein Purification by Nickel Affinity Chromatography
- 03:30Protein Activity Assay by Thin Layer Chromatography
- 07:30Results: Thin Layer Chromatography Reveals that C. difficile RSH is an Active ppGpp Synthetase
- 09:01Conclusion
Aqui, descrevemos um método para a purificação de enzimas pyrophosphokinase histidina-tag e utilizando cromatografia em camada fina dos produtos a ensaiar para a atividade enzimática em vitroe substratos marcadas com radioisótopos. O ensaio da atividade da enzima é amplamente aplicável a quinase, ciclase nucleotídeo ou reação de transferência de fósforo, cujo mecanismo inclui a hidrólise de nucleotídeos trifosfato.
