Environment
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
En optimalisert Rhizobox protokollen å visualisere rot vekst og respons på lokaliserte næringsstoffer
Chapters
Summary October 22nd, 2018
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Visualisere og måle rot vekst i situ er ekstremt utfordrende. Vi presenterer en passelig rhizobox metode for å spore root utvikling og spredning over tid i respons til nærings berikelse. Denne metoden brukes til å analysere mais genotypic forskjeller i roten plastisitet som svar på en organisk nitrogen kilde.
Transcript
Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål innen rot- og rhizosphere science, for eksempel hvordan røtter reagerer på lokaliserte flekker av næringsstoffer. De viktigste fordelene med denne teknikken er at den tillater gjentatte, ikke-invasive målinger av et enkelt rotsystem i jord, men det krever ikke spesialisert utstyr, og det er relativt billig. Samle delene til Rhizobox for montering.
Disse inkluderer foran og bak paneler laget av klar akryl ca 40 centimeter med 61 centimeter. På dette punktet er det side- og bunnspaces på toppen av bakpanelet. Avstandsslene er på linje med tidligere borede hull i panelene.
Klipp en lengde polyester polstring for å gå langs bunnen av Rhizobox. Legg polstringen på bakpanelet rett over den nederste avstandsspolen for å forhindre lekkasje. Sett topppanelet på plass på avstandsslene for å holde polstringen på plass.
Få nå maskinvare til å montere Rhizobox. Bruk en skrue, to skiver og sekskantmutter til hvert av de borede hullene. Plasser en skive på frontpanelet og stram skruen gjennom den til bakpanelet.
En annen vaskemaskin og sekskantmutteren. For å unngå jordtap, sørg for at alle skruene er svært stramme. Opprett også to avstandssyre for å danne behandlings- og kontrollpatchene.
Gjør dem med polyetylenplater med høy tetthet og fest en skrue øverst for å tillate bare delvis innsetting. For lett deprivasjon og varmereduksjon, lag et beskyttende etui som kan omslutte boksen. Til slutt, bygge en ramme for å oppmuntre røtter til å vokse mot bakpanelet.
Denne PVC rammen holder boksen i en vinkel på ca 55 grader. Har klar en homogenisert blanding av feltjord og sand. Begynn med en stor pose som inneholder substratblandingen for hver Rhizobox.
Merk to små ziptop poser per boks for behandling og kontroll patcher. Bruk en skala og vei 30 gram jordsandsubstrat. Overfør underlaget til kontrollposen.
På samme måte legger du til 30 gram substrat i behandlingsposen. Deretter veier ett gram nitrogen 15 merket nitrogenkilde og legger den til behandlingsposen. Bland substratet og nitrogenkilden grundig.
Arbeid med en Rhizobox og det er patch spacers. Sett de to avstandsslene inn i Rhizobox til skruen forhindrer videre bevegelse. Merk dybden på den nedre kanten av avstandsslene på siden av Rhizobox.
Fjern deretter avstandsslene for de neste trinnene. Bruk en trakt til å fylle Rhizobox fra den store posen med substrat til den markerte dybden. Flytt trakten frem og tilbake sakte og jevnt for å fylle Rhizobox jevnt.
Når underlaget er på den markerte dybden, legger du avstandsslene inn i boksen. De bør være fem centimeter fra venstre og høyre side av boksen. Fortsett å fylle boksen til underlaget er omtrent fem centimeter fra toppen av boksen.
Deretter ordner du langsom vanning av underlaget i esken med 150 milliliter vann med dryppemittere eller for hånd. La det hvile flere timer eller over natten slik at vannet sprer seg og området rundt hver avstandsskanne er grundig våt. På dette punktet fjerner du avstandsslene for å forlate et tomt hulrom for patchene.
Nå, tape åpenhet film til utsiden av boksen. Bruk gjennomsiktigheten til å merke ett plaster som behandling og den andre som kontroll. Bruk deretter trakten og det forberedte kontrollsubstratet til å fylle kontrolloppdateringen.
Dette er den merkede kontrolloppdateringen etter at den er fylt. Gå videre for å fylle behandlingspatchen med det tilberedte behandlingssubstratet på samme måte. Når du er ferdig, bruker du en permanent markør til å spore grensen for hver på gjennomsiktighetsfilmen.
Deretter fyller du Rhizobox jevnt med det gjenværende substratet fra den store posen. Avslutt med å spore toppen av underlaget på gjennomsiktigheten. Når boksen er klar, transplanter et spiret frø.
Bruk først en smal slikkepott til å grave et hull i midten av Rhizobox. Hullet skal være 2,5 centimeter dypt. Plasser det spirede frøet inni, slik at de radikale er orientert direkte nedover.
Spor plasseringen av frøet på gjennomsiktigheten som er festet til boksen. Dekk frøet, og vann det deretter med opptil 50 milliliter av deionisert vann. Deretter legger du ved boksen i sitt tilfelle for å forhindre at lys samhandler med røttene under vekst.
Ta boksen til rammen forberedt for det. Plasser Rhizobox på rammen for å oppmuntre til vekst mot bakrammen. Hent boksen etter hver tredje til fire dager med plantevekst.
Med saken fjernet, spor plantene synlige røtter ved hjelp av en annen fargepenn hver gang. Som i dette eksemplet, være konsekvent og systematisk for dette trinnet. Sett den overbygde boksen tilbake på stativet og sørg for at den er i sin opprinnelige retning.
Her plottes de totale rotlengdene til de sporede røttene på baksiden av 24 Rhizoboxes mot rotlengder målt ved hjelp av en skanner og dataprogramvare. Et lignende plott for sporede rotmønstre på forsiden av boksen viser at røttene vokste fortrinnsvis mot baksiden av boksen. De konsekvente bakkene i denne tomten av logaritmen av den totale rotlengden som en funksjon av dager med vekst tyder på at vekstratene var like mellom de forskjellige boksene.
Her er data for rotlengdetetthet for en mais genotype. Tettheten for kontrollplasteret er mindre enn tettheten for nitrogenbehandlet patch. Eksperimentet sammenlignet rotlengdetetthet for seks separate maisgenotyper.
I alle tilfeller var rotlengdetettheten større i nitrogen 15 merket behandlingsplaster kontra kontrollplasteret. Denne protokollen kan kombineres med andre metoder som sphygmography eller florescence in situ hybridisering for å visualisere spacial distribusjon av enzymaktivitet eller mikrober.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
