Biology
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Eine Platte-Wettbewerb-Assay als eine schnelle vorläufige Beurteilung der Krankheit Unterdrückung
Chapters
Summary October 28th, 2018
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Dargestellt ist ein Protokoll für einen Teller-Wettbewerb-Assay um festzustellen, ob ein bestimmter Kompost anfällig ist für Bakterien und Pilze, die Wachstum von Rhizoctonia Solaniunterdrücken.
Transcript
Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Zusammenhang mit der biologischen Kontrolle von bodengestützten Pflanzenpathogenen zu beantworten. Der Goldstandard für die Prüfung von Materialien wie Kompost ist ein Pflanzenbioassay, um zu testen, ob es für die Pflanzen giftig ist. Das dauert jedoch drei Wochen.
Diese Methode kann in etwa zwei bis drei Tagen durchgeführt werden. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie einfach, erschwinglich und effektiv ist. Dieser Test ist ein schnelles Screening von spezifischem Kompost, um das Wachstum von Rhizoctonia solani zu unterdrücken.
Dieser Test kann jedoch auch gegen andere bodengestützte Pflanzenpathogene wie Fusariums, Pythiums und Phytophthoras eingesetzt werden. Die visuelle Demonstration dieser Methode ist von entscheidender Bedeutung, da sie darauf achtet, eine reine Kultur eines Pilzes zu isolieren und aufrechtzuerhalten und gleichzeitig eine Kontamination zu vermeiden. Demonstriert wird das Isolationsverfahren von Taylor Readyhough, einem Doktoranden aus meinem Labor.
Emma Wright, studentische Studentin aus meinem Labor, wird den Wettbewerbstest demonstrieren. Zu Beginn, säen rote RettichSamen in Böden bekannt, um eine Geschichte der Krankheit durch R.solani verursacht haben. Nach drei bis vier Wochen die Sämlinge aus dem Boden entfernen und mit Leitungswasser abspülen.
Schneiden Sie mit einer Rasierklinge ein Zentimeter Segmente des Hypocotyls und der Wurzel, die eine braune Farbe haben. Verwenden Sie dann flammensterilisierte Zangen, um die Segmente für eine Minute in eine 10%bleichlösung zu tauchen. Danach spülen Sie die Segmente in sterilem Wasser.
Als Nächstes verwenden Sie flammensterilisierte Zangen, um die Segmente auf ein Papiertuch zu übertragen. Die Segmente trocken klopfen und in eine Petrischale mit Wasseragar geben. Legen Sie die Petrischale in einen Behälter mit deckel und inkubieren Sie die Segmente bei Raumtemperatur.
Um eine Tochterkultur zu etablieren, übertragen Sie eines der Segmente in die Mitte eines frischen Tellers Kartoffel dextrose Agar. Danach autoklavn 25-Milliliter-Reagenzgläser mit 10 Milliliter Wasser. Fügen Sie zwei 0,5-Gramm-Proben jeder Testprobe zu einem Paar autoklavierter Reagenzgläser mit 10 Milliliter nissterilem Wasser hinzu und schütteln Sie die Reagenzgläser über Nacht.
Nach 24 Stunden 1,5 Gramm einfachen Agar und 90 Milliliter destilliertes Wasser in ein Paar konische Kolben geben. Nach dem Autoklavieren der Kolben, legen Sie sie in ein 45-Grad-Celsius-Wasserbad für 30 Minuten. Als nächstes gießen Sie die autoklavierte Referenzprobe und die lebende Probe in den geschmolzenen Agar.
Gießen Sie die Mischungen aus jedem Kolben in fünf Petri-Gerichte. Um die einheimischen Mikroben zu schützen, ist es wichtig, den Kompost nicht hinzuzufügen, während der Agar zu heiß ist. Lassen Sie den Agar daher auf 45 Grad Celsius abkühlen, bevor Sie den Kompost hinzufügen.
Übertragen Sie mit aseptischer Technik Stücke von R.solani auf jedes Paar Probenplatten. Dann inkubieren Sie die Platten bei Raumtemperatur für ein bis zwei Tage. Verwenden Sie schließlich ein klares, flaches Lineal und ein Stereomikroskop, um den Radius des Myzels in jeder Platte auf den nächsten Millimeter zu messen.
In diesem Protokoll unterdrückten Extrakte aus lebenden Komposten das R.solani-Wachstum deutlich stärker als autoklavierte Proben, was zeigt, dass die Wirkung mikrobielle und nicht nährstoffbasierte waren. Unterdrückung wird als Wachstumsreduktion im Vergleich zur autoklavierten Steuerung gemessen. Das Wachstum wurde durch die Dauer der Reifung oder Aushärtung des Komposts nicht beeinflusst.
Das Wachstum wurde durch Kompostmethode und Rezeptzutaten, insbesondere mit Vermicompost, Windrow-Prozessen und Rezepten mit Hartholzrinde, erheblich beeinflusst. Nach seiner Entwicklung kann diese Technik ein Kandidat für die kommerzielle Zertifizierung von Kompost für krankheitsunterdrückende Eigenschaften sein.
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