Bioengineering
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Detectie van endotoxinen in Nano-formuleringen gebruiken Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) testen
Summary January 30th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Detectie van endotoxines in technisch vervaardigde nanomaterialen vertegenwoordigt een van de grote uitdagingen op het gebied van de nanogeneeskunde. Hier, presenteren we een case-studie die het kader bestaat uit drie verschillende LAL formaten beschrijft te schatten van potentiële endotoxine besmetting in nanodeeltjes.
Transcript
Deze methode kan helpen antwoord op medisch gebied over de veiligheid van nano-geneesmiddelen. De voordelen van deze techniek is dat het standaard is, en wereldwijd wordt gebruikt voor de evaluatie van producten, Nano-geneesmiddelen. Demonstratie van de procedure, zal Barry Neun, op de Nano Technology Karakterisering Lab.
Gebruik voor de standaardpreparaat van 900 microliter limulus amebocyte lysaat of LAL-water voor het hanteren van standaard. En 100 microliters van de controle standaard endotoxine, om zo veel tussentijdse verdunningen voor te bereiden als nodig is, om de voorbereiding van een kalibratie standaard met een concentratie van een endotoxine-eenheid per milliliter mogelijk te maken. Bereid vervolgens met behulp van 900 microliter water van LAL-kwaliteit en 100 microliter van de endotoxine-eenheid per milliliterkalibratienorm een tweede kalibratienorm voor, bij een concentratie van 0,1 endotoxine-eenheid per milliliter.
Herhaal vervolgens de seriële verdunning om twee lagere kalibratienormen voor te bereiden. Om in totaal vier kalibratienormen te verkrijgen, variërend van 0001 tot één endotoxine-eenheid per milliliter. Voor het bereiden van een 05 endotoxine-eenheid per milliliter kwaliteitscontrole, combineert 50 microliter van de endotoxine-eenheid per milliliter van de controle standaard endotoxine oplossing, met 950 microliter water van LAL-kwaliteit.
Selecteer vervolgens in de software de instrumentinstellingen en maak de sjabloon. Selecteer Gegevens verzamelen en voer de test-id en gegevensgroep in op het algemene tabblad. Selecteer onder het tabblad hardware het instrumenttype en de LAL-methode en controleer of er een serienummer, de systeem-id en de seriepoortgegevens op het scherm worden weergegeven.
Klik twee keer goed om de instrumentselectie en de communicatie met het instrument te bevestigen en voer de voorbeeld-ID's in dezelfde volgorde in als de monsters worden getest. Gebruik vervolgens de standaardknoppen om de standaardcurve voor negatieve besturingselementen in te voeren en monsters te testen. Voeg het juiste volume van de negatieve controle kalibratie normen, en kwaliteitscontrole in dubbele voorgelabelde glazen buizen.
En voeg het juiste volume van LAL toe aan de eerste test verachtelijk. Vortex de verachtelijke kort, en plaats het flesje in de juiste tests sleuven in het instrument carrousel. Voer vóór het laden van de monsters verschillende verdunningen van het testnanomateriaal uit binnen de maximaal geldige verdunning zoals aangetoond.
Om een 05 endotoxine-eenheid per milliliter remmingsverbeteringscontrole voor te bereiden, combineert u 25 microliter van de endotoxine-eenheid per milliliter van de standaard endotoxineoplossing, met 475 microliter van het testnanomateriaal bij een bepaalde verdunning. Na vortexing, laad de juiste innovatie verbetering controles, en de niet gespikte studie monsters in het instrument. Dan aliquot unspiked en de spiked nano materialen bij een specifieke verdunning in vooraf gelabelde buizen.
Voordat vortexing, en laden in de instrumentencarrousel. Om een Gel-Clot LAL uit te voeren, bereid je controlestandaard endotoxine voor op een uiteindelijke concentratie van vier lambda en combineer je 100 microliter standaard, met 100 microliter water, of testmonster om een uiteindelijke concentratie van controlestandaard endotoxine twee lambda te bereiken. Voeg 100 microliter Lysine toe aan elke lambdaverdunning.
Vortex de buizen kort, en plaats het rek van buizen in een 37 graden Celsius waterbad voor een uur. Aan het einde van de incubatie, omkeren van de buizen met een gladde beweging, en handmatig opnemen van de resultaten met behulp van plus voor een stevige stolsel, en minus voor geen stolsel, of een losse stolsel. In deze representatieve analyse, PEGylated liposomale doxorubicine interfereerde met chromogene LAL bij verdunning vijf, maar deze interferentie werd overwonnen bij hogere verdunningen.
Spike herstel was tussen 50 en 200%, toen de formulering werd getest bij verdunningen 50 en 500 in de troebelheid en chromogene LAL, evenals bij verdunning vijf, in de troebelheid LAL. Wanneer gecorrigeerd door de verdunningsfactor, waren de resultaten consistent tussen wanen in beide essays. Bovendien waren de resultaten consistent tussen de drie essayformaten.
Vergeet niet dat elk monster heeft zijn eigen bereik van verdunningen, elk LAL-formaat maakt gebruik van zijn controle standaard in de doxine en lysate, en dat de buizen gebruikt om de verdunningen voor te bereiden, en om een reactie uit te voeren op verschillende voor elke LAL essay. Voor deze procedure andere methoden zoals kan worden uitgevoerd om aanvullende vragen over materiaal te beantwoorden Na de ontwikkeling ervan, deze techniek de weg vrijgemaakt voor de hechtingen en het gebied van nano geneeskunde, om de medische toepassingen van nano-technologie geformuleerde geneesmiddelen bij de mens te verkennen, en klinische modellen, waaronder maar niet beperkt tot niet-menselijke primaten, konijnen, honden en ratten. Vergeet niet dat het werken met doxine zeer gevaarlijk kan zijn en de voorzorgsmaatregelen, zoals het dragen van persoonlijke beschermingsmiddelen, moeten altijd worden genomen tijdens het uitvoeren van deze procedure.
Please enter your institutional email to check if you have access to this content
has access to
BackLogin to access JoVE
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
To receive a free trial, please fill out the form below.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You
Thank You
Thank You
