Bioengineering
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Nachweis von Endotoxin im Nano-Rezepturen mit Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) Assays
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Erkennung von Endotoxinen in Nanomaterialien stellt eine der großen Herausforderungen im Bereich der Nanomedizin. Hier präsentieren wir Ihnen eine Fallstudie, die beschreibt den Rahmen, bestehend aus drei verschiedenen LAL-Formaten, mögliche Endotoxin-Kontamination in Nanopartikel zu schätzen.
Transcript
Diese Methode kann helfen, im medizinischen Bereich über die Sicherheit von Nanoarzneimitteln zu antworten. Der Vorteil dieser Technik ist, dass es Standard ist, und wird weltweit für die Bewertung von Produkten verwendet, Um Nano-Medikamente. Demonstration des Verfahrens, wird Barry Neun, im Nano Technology Characterization Lab sein.
Verwenden Sie für die Kalibrierungsstandardvorbereitung 900 Mikroliter Limulus-Amebocytlysat oder LAL-Wasser. Und 100 Mikroliter Kontrollstandard Endotoxin, um so viele Zwischenverdünnungen wie nötig vorzubereiten, um die Herstellung eines Kalibrierstandards mit einer Konzentration von einer Endotoxineinheit pro Milliliter zu ermöglichen. Mit 900 Mikroliter LAL-Wasser und 100 Mikrolitern der einheit pro Milliliter Kalibrierstandard erstellen Sie einen zweiten Kalibrierstandard bei einer Konzentration von 0,1 Endotoxineinheit pro Milliliter.
Wiederholen Sie dann die serielle Verdünnung um das Zehnfache, um zwei niedrigere Kalibrierstandards vorzubereiten. Um insgesamt vier Kalibrierstandards zu erhalten, die von 0001 bis zu einer Endotoxineinheit pro Milliliter reichen. Zur Herstellung einer 05 Endotoxineinheit pro Milliliter Qualitätskontrolle, kombiniert 50 Mikroliter der einen Endotoxineinheit pro Milliliter der Kontrollstandard-Endotoxin-Lösung, mit 950 Mikroliter LAL-Wasser.
Wählen Sie als Nächstes in der Software die Geräteeinstellungen aus, und erstellen Sie die Vorlage. Wählen Sie Daten sammeln aus, und geben Sie die Test-ID und die Datengruppe auf der Registerkarte Allgemein ein. Wählen Sie auf der Registerkarte Hardware den Gerätetyp und die LAL-Methode aus, und stellen Sie sicher, dass eine Seriennummer, die System-ID und die Informationen zum seriellen Anschluss auf dem Bildschirm angezeigt werden.
Klicken Sie zwei Mal auf okay, um die Instrumentenauswahl und die Kommunikation mit dem Instrument zu bestätigen, und geben Sie die Beispiel-IDs in der gleichen Reihenfolge ein, in der die Samples getestet werden. Verwenden Sie dann die Standardschaltflächen, um die Negative-Steuer-Standardkurve einzugeben, und testen Sie Beispiele. Fügen Sie das entsprechende Volumen negativer Kontrollkalibrierungsstandards und Qualitätskontrolle in doppelte vorbeschriftete Glasröhren ein.
Und fügen Sie das entsprechende Volumen von LAL zum ersten Test-Abscheu hinzu. Wirbeln Sie den Teufel kurz, und legen Sie die Durchstechflasche in die entsprechenden Testschlitze im Instrumentenkarussell. Führen Sie vor dem Beladen der Proben mehrere Verdünnungen des Test-Nanomaterials innerhalb der maximal gültigen Verdünnung durch, wie gezeigt.
Um eine 05 Endotoxineinheit pro Milliliter Hemmungsverbesserungskontrolle vorzubereiten, kombinieren Sie 25 Mikroliter der einen Endotoxineinheit pro Milliliter Kontrollstandard-Endotoxinlösung, mit 475 Mikrolitern des Test-Nanomaterials bei einer gegebenen Verdünnung. Laden Sie nach dem Wirbeln die entsprechenden Steuerelemente für die Innovationsverbesserung und die nicht gespickten Studienproben in das Gerät. Dann aliquot unspiked und die gespickten Nano-Materialien bei einer bestimmten Verdünnung in vorbeschriftete Rohre.
Vor dem Wirbeln und Laden in das Instrumentenkarussell. Um ein Gel-Clot LAL durchzuführen, bereiten Sie die Kontrollstandard-Endotoxin auf eine endgültige Konzentration von vier Lambda vor und kombinieren Sie 100 Mikroliter Standard mit 100 Mikroliter Wasser oder Eine Testprobe, um eine endgültige Konzentration des Kontrollstandards Endotoxin zwei Lambda zu erreichen. Fügen Sie 100 Mikroliter Lysin zu jeder Lambda-Verdünnung hinzu.
Wirbeln Sie die Rohre kurz, und legen Sie das Rack der Rohre in einem 37 Grad Celsius Wasserbad für eine Stunde. Am Ende der Inkubation, invertieren Sie die Rohre mit einer glatten Bewegung, und zeichnen Sie die Ergebnisse manuell mit Plus für ein festes Gerinnsel, und Minus für kein Gerinnsel, oder ein loses Gerinnsel. In dieser repräsentativen Analyse störte PEGylatd liposomale doxorubicin mit chromogenem LAL bei Verdünnung fünf, jedoch wurde diese Interferenz bei höheren Verdünnungen überwunden.
Die Spike-Wiederherstellung lag zwischen 50 und 200%, als die Formulierung an den Verdünnungen 50 und 500 in der Trübung und chromogenen LAL sowie bei Verdünnung 5 in der Trübung LAL getestet wurde. Bereinigt um den Verdünnungsfaktor waren die Ergebnisse zwischen den Wahnvorstellungen in beiden Aufsätzen konsistent. Darüber hinaus waren die Ergebnisse zwischen den drei Essayformaten konsistent.
Denken Sie daran, dass jede Probe ihren eigenen Bereich von Verdünnungen hat, jedes LAL-Format verwendet seinen Kontrollstandard im Doxin und Lysat, und dass die Rohre verwendet werden, um die Verdünnungen vorzubereiten, und eine Reaktion mit unterschiedlichen für jeden LAL-Essay durchzuführen. Für dieses Verfahren andere Methoden wie Kann durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen über Material zu beantworten Nach seiner Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für die Nähte und den Bereich der Nanomedizin, um die medizinischen Anwendungen der Nanotechnologie formulierte Medikamente beim Menschen zu erforschen, und klinische Modelle einschließlich, aber nicht beschränkt auf nicht menschliche Primaten, Kaninchen, Hunde und Ratten. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Doxin extrem gefährlich sein kann und die Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen persönlicher Schutzausrüstung immer während der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden sollten.
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Biotechnik Ausgabe 143 Endotoxin Nanopartikel LAL-Test Störungen Spike Recovery Pyrogenität KontaminationRelated Videos
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