Påvisande av Endotoxin i Nano-formuleringar använder Limulus immobiliserat Lysate (LAL) analyser

Denna metod kan hjälpa till att svara på det medicinska området om säkerhet för nanoläkemedel. Fördelarna med denna teknik är att det är standard, och används över hela världen för utvärdering av produkter, Till nano läkemedel. Demonstration av förfarandet, kommer att Vara Barry Neun, på Nano Technology Characterization Lab.

För kalibrering standard beredning, använd 900 mikroliter av limulus amebocyte lysate, eller LAL grade vatten. Och 100 mikroliter av kontroll standard endotoxin, att förbereda så många mellanliggande utspädningar som behövs, för att möjliggöra utarbetandet av en kalibrering standard med en koncentration av en endotoxin enhet per milliliter. Sedan med hjälp av 900 mikroliter av LAL-kvalitet vatten, och 100 mikroliter av en endotoxin enhet per milliliter kalibrering standard, förbereda en andra kalibrering standard, vid en koncentration av 0,1 endotoxin enhet per milliliter.

Upprepa sedan den seriella tiofaldig utspädning för att förbereda två lägre kalibreringsstandarder. Att få totalt fyra kalibreringsstandarder, alltifrån 0001 till en endotoxinenhet per milliliter. För att förbereda en 05 endotoxin enhet per milliliter kvalitetskontroll, kombinerar 50 mikroliter av en endotoxin enhet per milliliter av kontroll standard endotoxin lösning, med 950 mikroliter av LAL-kvalitet vatten.

Nästa i programvaran väljer instrumentinställningarna, och skapa mallen. Välj samla in data, och ange test-ID och datagrupp i den allmänna fliken. Under fliken maskinvara väljer du instrumenttyp, och LAL-metoden, och kontrollerar att ett serienummer, system-ID och den seriella portinformationen visas på skärmen.

Klicka på okej två gånger för att bekräfta instrumentvalet, och kommunikationen med instrumentet, och ange prov-ID:t i samma ordning att proverna ska testas. Använd sedan standardknapparna för att ange den negativa kontrollstandardkurvan, och testa prov. Lägg till lämplig volym av standarder för kalibrering av negativ kontroll, och kvalitetskontroll i dubbla förmärkta glasrör.

Och lägg till lämplig volym LAL till det första testet vidriga. Vortexa den avskyvärda kort, och placera injektionsflaskan i lämpliga tester slitsar i instrumentet karusellen. Innan du laddar proverna, utför flera spädningar av testnana-materialet inom den maximala giltiga utspädningen som påvisas.

För att förbereda en 05 endotoxinenhet per milliliter av inhibitionsförstärkningskontroll, kombinera 25 mikroliter av den ena endotoxinenheten per milliliter av kontrollstandard endotoxinlösning, med 475 mikroliter av testnannasmaterialet vid en given utspädning. Efter virvelning, ladda lämpliga innovationsförstärkningskontroller, och de unspiked studieproverna i instrumentet. Sedan alikvot unspiked och spetsade nano material vid en specifik utspädning i pre märkta rör.

Innan virvelning, och lastning i instrumentet karusellen. För att utföra en Gel-Clot LAL, förbereda kontroll standard endotoxin till en slutlig koncentration av fyra lambda, och kombinera 100 mikroliter av standard, med 100 mikroliter vatten, eller testprov för att uppnå en slutlig koncentration av kontroll standard endotoxin två lambda. Tillsätt 100 mikroliter Lysin till varje lambdautspädning.

Vortexa rören kort, och placera rack av rör i en 37 graders Celsius vattenbad i en timme. I slutet av inkubationen, invertera rören med en smidig rörelse, och manuellt registrera resultaten med plus för en fast propp, och minus för ingen propp, eller en lös propp. I denna representativa analys, PEGylated liposomal doxorubicin stört kromogena LAL vid utspädning fem, var dock denna inblandning övervinnas vid högre utspädningar.

Spike återhämtning var mellan 50 och 200%när formuleringen testades vid spädningar 50 och 500 i grumlighet och kromogena LAL, samt vid spädning fem, i grumlighet LAL. När justeras av utspädningsfaktorn var resultaten konsekventa mellan vanföreställningar i båda uppsatserna. Dessutom var resultaten konsekventa mellan de tre uppsatsformaten.

Kom ihåg att varje prov har sitt eget utbud av utspädningar, varje LAL-format använder sin kontrollstandard i doxin och lysate, och att de rör som används för att förbereda utspädningarna, och att utföra en reaktion på olika för varje LAL uppsats. För detta förfarande andra metoder som Kan utföras för att svara på ytterligare frågor om material Efter dess utveckling, banade denna teknik vägen för suturer och området nano medicin, att utforska de medicinska tillämpningarna av nano-teknik formulerade läkemedel hos människor, och kliniska modeller inklusive men inte begränsat till icke mänskliga primater, kaniner, hundar, och råttor. Glöm inte att arbeta med doxin kan vara extremt farligt och försiktighetsåtgärder såsom att bära personlig skyddsutrustning, bör alltid vidtas när du utför denna procedur.