Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Sperm samling af Differential kvalitet ved hjælp af tæthed Gradient centrifugering
Chapters
Summary November 29th, 2018
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
I dette papir, vi sigter mod at beskrive tæthed gradient centrifugering teknik og dens anvendelse i sæd fysiologi forskning ydeevne.
Transcript
Denne metode kan hjælpe med at besvare centrale spørgsmål inden for sædfysiologi, såsom de kemiske determinates af sædkvalitet. Den største fordel ved denne teknik er det evne til at adskille store mængder af prøve efter kvalitet, samt tilpasningsevne i forhold til alternative metoder. Selv om denne metode kan give indsigt i forskellene i sædkvalitet, kan det også anvendes på andre prøver såsom blandede celletyper eller subcellulære komponenter med forskellige tætheder.
Til at begynde, lave to 3 milliliter Percoll fortyndinger i to separate rør. I et rent reagensglas fortyndes 1 ml sædprøve med 2 milliliter PBS. Rør den forsigtigt for at blande opløsningen.
Tilsæt 3 milliliter af den lavere tæthed Percoll sollution til et sterilt konisk rør. Derefter pipetters forsigtigt 3 milliliter af percoll-opløsningen med højere tæthed under percollopløsningens lavere tæthed. Mens det koniske rør vippes i en vinkel på 45 grader, pipetteres 3 milliliter af den fortyndede sædprøve oven på Percoll-tæthedens gradient.
Efter klargøring af et tomt rør centrifugeres begge rør ved 1500 Gs i 20 minutter. Sikre, at tre forskellige lag af sæd er dannet i karret efter centrifugering. Ved hjælp af en pipette indsamle de tre lag af sæd, begyndende med det øverste lag, efterfulgt af det midterste lag, og slutter med den hårde pellet i bunden af røret.
Overfør hvert lag til et sterilt mikrocentrifugerør. Hver sædprøverne fortyndes med 1,5 milliliter PBS, og prøverne centrifugeres ved 1500 Gs i ti minutter. Endelig hældes supernatant og rekonstituere pellets med motilitet buffer.
I denne protokol blev Percoll-tæthedsgradientcentrifugeringsteknikken eller PDGC brugt til at adskille en sædprøve i tre forskellige lag. Sædcellerne adskiller sig i et lag af høj kvalitet under opløsningen med højere tæthed, et medium kvalitetslag mellem de højere og lavere tæthedsopløsninger og et lag af lav kvalitet over den lavere tæthedsopløsning. Disse forskelle i sædkvalitet fremgår af forskelle i levedygtighed, mobilitet og gennemtrængelighed.
Mens du forsøger denne procedure, er det vigtigt at huske, at prøver skal bringes til stuetemperatur. PDGC's succes afhænger af omhyggelig forberedelse af gradienten samt omhyggelig indsamling af de isolerede lag. Efter det er udvikling, denne teknik banede vejen for vores forskning inden for sædperdiomics at udforske bio markører for frugtbarhed i aviær arter.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
