Summary
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Hier presenteren we een protocol te induceren post-takt depressie bij ratten door afsluiter het midden cerebrale slagader via de interne halsslagader. We gebruiken de Porsolt geforceerde zwem test en de sacharose voorkeur test om geïnduceerde depressieve stemmingen te bevestigen en te evalueren.
Transcript
Ons protocol stelt een nieuwe mediale cerebrale slagader occlusie techniek bij ratten om te helpen bij het bestuderen van het mechanisme van post-stroke depressie ontwikkeling en het vinden van een meer efficiënte therapie. Het belangrijkste voordeel van onze techniek is de mogelijkheid om de variabiliteit in gewichtsveranderingen, hersenoedeem en infarctvolume te verminderen en om proceduregerelateerde sterfgevallen te minimaliseren. Na bevestiging van een gebrek aan reactie op staart snuifje in een mannelijke 300 tot 350-gram Sprague Dawley rat, plaats het dier op een 37 graden Celsius verwarmingsplaat en gebruik een rectale sonde voor het toezicht op de kern lichaamstemperatuur.
Breng zalf aan op de ogen van het dier en scheer het haar vanaf de nek. Desinfecteer vervolgens de blootgestelde huid met 70 procent alcoholchlorhexidine en bedek de rat met het steriele chirurgische laken voordat de occlusie volgens de standaardtechnieken wordt uitgevoerd. Om de neurologische ernstscore te verkrijgen, plaatst u een afgesloten rat op een vlak oppervlak en laat u het dier vrij bewegen.
Na een minuut, trek voorzichtig de rat naar achteren door de staart en rang van het dier gang reactie. Om het infarct volume te meten, scan de voorbereide gekleurde hersenen plakjes op een 1, 600 bij 1, 600 stippen per inch resolutie en gewas en standaardiseren van de schaal voor alle beelden. Laad vervolgens de gestandaardiseerde afbeeldingen in een geschikt softwareprogramma voor beeldanalyse en gebruik een traceringstool om het gebied van gemarkeerde bleekheid te meten in zes opeenvolgende segmenten van twee millimeter om de infarctgrootte te bepalen als een percentage van het hele hersensegment.
30 tot 33 dagen na de operatie, breng de dieren naar een gesloten, rustige, lichtgecontroleerde kamer in individuele kooien, en plaats een fles met 100 milliliter van 1%sucrose oplossing in elke kooi gedurende 24 uur. De volgende dag, verwijder de flessen evenals het voedsel en drinkwater voor 12 uur. Plaats aan het einde van de ontberingsperiode één fles met 100 milliliter sacharoseoplossing en één fles met 100 milliliter kraanwater in elke kooi gedurende vier uur.
Vervolgens registreert u het volume van de sacharoseoplossing en het verbruikte water om de affiniteit met sacharosevoorkeur voor elk dier te kunnen berekenen. Voor porsolt's gedwongen zwemtest, 30 tot 33 dagen na de operatie, plaats elke rat eerst in een verticale plexiglascilinder met 80 centimeter Celsius water gedurende 15 minuten. Laat de rat aan het einde van de gewenningsperiode 15 minuten drogen in de verwarmde behuizing bij 32 graden Celsius voordat het dier terugkeert naar zijn thuiskooi.
De volgende dag, de rat terug te keren naar de cilinder voor een laatste vijf minuten, het opnemen van de vijf minuten test om de berekening van de totale duur van de immobiliteit in die periode mogelijk te maken. Histologische analyse onthult een statistisch significant infarct volume als een percentage van het totale hersenvolume post-MCAO in vergelijking met dieren in de sham control groep. Een statistisch significant hersenoedeem wordt ook waargenomen bij de proefdieren in vergelijking met de sham control groep.
MCAO-dieren vertonen lagere neurologische prestaties in vergelijking met door schijnbediende dieren na 50 minuten, 24 uur en zeven dagen na de operatie. MCAO ratten consumeren ook een aanzienlijk lagere hoeveelheid sacharose en vertonen een langere immobiliteit tijdens porsalt's gedwongen zwemmen tests in vergelijking met de sham-operated dieren. Dit is een belangrijk model voor gedragsslagstudies en kan dienen als een instrument voor het beoordelen van toekomstige therapieën of het verstrekken van kritische preklinische gegevens over de werkzaamheid van therapeutische stoffen.
Tags
Gedrag
ischemische beroerte
poststroke depressie
rat model
Midden cerebrale slagader occlusie
infarct volume
hersenoedeem
Porsolt gedwongen zwemmen test
sacharose voorkeur test
