A pneumonectomia esquerda combinado com Monocrotaline ou Sugen como modelo de hipertensão pulmonar em ratos

Este protocolo é significativo porque produz o melhor modelo possível para hipertensão arterial pulmonar. Nenhum outro modelo produz as lesões plexiformes encontradas em pacientes com AP. A principal vantagem é que dobramos o fluxo de sangue no pulmão direito e artéria pulmonar, causando danos endoteliais e forçando os pulmões a trabalhar duas vezes mais duro.

Nosso grupo desenvolveu um modelo altamente eficiente de hipertensão arterial pulmonar para desenvolver terapêutica. Além da hipertensão arterial pulmonar, este método pode ser útil na medicina regenerativa e poderia dar uma visão de outras doenças com aumento do fluxo pulmonar, como defeitos cardíacos congênitos ou pacientes pós-pneumonectomia. Para alguém que nunca realizou essa técnica, meu conselho é seguir o protocolo exatamente e ter certeza de que o cirurgião pode ver exatamente o que está fazendo.

Depois de anestesiar o rato com 4% de isoflurane, o animal é entubado usando uma luz de ganso de fibra óptica para iluminar a traqueia. Insira um cateter de calibre 16 na laringe e use um espelho frio para observar a condensação da umidade na respiração expirada do cateter para confirmar a intubação. Conecte o rato ao ventilador e coloque o rato sob o microscópio na posição de decúbito direito em uma almofada de aquecimento Celsius de 37 graus.

Segure os membros dianteiros com fita adesiva e use cortadores para raspar o tórax esquerdo por trás da perna dianteira até o final da caixa torácica. Limpe a pele exposta com três soluçãos sequenciais de iodo povidone de 10% e lenços de 70% de etanol, e coloque um oxímetro de pulso no pé do rato para monitorar a frequência cardíaca e a saturação de oxigênio durante toda a cirurgia. Agora, ajuste o microscópio e leve a visão cirúrgica em foco.

Em seguida, coloque uma cortina estéril sobre o corpo do rato e a bandeja de instrumentos para criar um ambiente estéril. E, finalmente, coloque instrumentos estéreis na bandeja de instrumentos estéreis. Para realizar uma pneumonectomia esquerda, use tesoura Cooley-Mayo e fórceps de tecido Gerald para cortar um buraco de dois a três centímetros na cortina cirúrgica, e use uma lâmina cirúrgica para fazer uma incisão lateral de dois centímetros de comprimento no tórax esquerdo.

Use a tesoura Cooley-Mayo para cortar cada camada de tecido até que as costelas e músculos intercostais sejam expostos. Use um mosquito para fazer um buraco através do músculo do terceiro espaço intercostal. Usando uma sonda de duas pontas, mova o pulmão para visualizar a artéria pulmonar, e use a tesoura McPherson-Vannas Iris para abrir os músculos intercostais a uma largura de cerca de um a dois centímetros.

Coloque um pequeno retrátil auto-retentor na pleura esquerda para manter as costelas e músculos abertos, e mova o pulmão esquerdo mais baixo no abdômen para permitir o acesso à artéria pulmonar e ao brônquio. Para ligadura do brônquio principal esquerdo e artéria pulmonar, primeiro, carregue um Hemoclip médio em um aplicador de clipe ligante e use as fórceps atraumáticas Wangensteen para levantar cuidadosamente a porção superior do pulmão esquerdo para expor a artéria pulmonar. Feche o clipe e o aplicador ao redor da artéria, tomando cuidado para não fechar ou romper a veia azygos esquerda.

E abra ainda mais a incisão usando a amígdala para separar as fibras musculares. Depois de carregar outro Hemoclip médio no aplicador do clipe ligante, use as fórceps atraumáticas e fórceps de tecido padrão para levantar a porção inferior do pulmão para fora da incisão até que o brônquio principal esquerdo e a veia pulmonar esquerda sejam visualizados. Ligar cuidadosamente o brônquio principal esquerdo e a veia pulmonar junto com o segundo Hemoclip, e use uma tesoura para remover o pulmão sem cortar ou rasgar o clipe.

Em seguida, use um pequeno pedaço de gaze estéril para absorver qualquer sangue e conter qualquer sangramento. Use o suporte de agulha e uma sutura de prolene 4-0 para fechar as costelas e músculos intercostais. Antes de fechar os músculos intercostais, insira um cateter de 16 bitolas na cavidade torácica longe da incisão cirúrgica e no sétimo espaço intercostal, e remova imediatamente a agulha, deixando o cateter no lugar.

Coloque uma sutura de 5-0 na pele e ao redor do tubo torácico para que, quando o tubo torácico for removido, o orifício seja amarrado e amarre as suturas para fechar as costelas. Feche a pele e o espaço subcutâneo com uma sutura 5-0 em execução, e use uma seringa de três mililitros para evacuar o ar da cavidade pleural através do cateter para restaurar a pressão negativa normal no tórax. Use um suporte de agulha para fixar imediatamente o cateter para evitar que o ar volte para a cavidade torácica.

Retire o cateter e amarre a sutura para fechar o orifício. No grupo pneumonectomia e monocrotalina, a hipertensão pulmonar grave desenvolve-se até o dia 21, como evidenciado por um aumento na pressão média da artéria pulmonar em comparação com o controle de animais falsos não tratados. No grupo pneumonectomia mais Sugen, a pressão média da artéria pulmonar é três vezes maior do que no grupo controle.

A pressão sistólica ventricular direita também é muito maior tanto nos animais tratados com monocrotalina quanto em Sugen, em comparação com o grupo controle. Em hematoxilina e eosina manchadas seções normais de tecido pulmonar de ratos, espaços entre os alvéolos e as estruturas alveolares são aparentes, e os vasos são claros e de espessura normal. No pulmão da hipertensão arterial pulmonar, há evidência de remodelação, espessamento das paredes do vaso, constrição grave dos vasos e inflamação e arterite pulmonar focal.

O animal tem que compensar a perda de um pulmão, por isso é importante ser paciente durante o período de recuperação. Monitore os sinais vitais e dê oxigênio adicional ou volume pulmonar conforme necessário. Sugen cria apoptose endielial que é sinal clínico relevante de hipertensão arterial pulmonar.

O modelo de pneumonectomia esquerda em roedores abriu caminho para os cientistas estudarem anormalidades de fluxo e desenvolverem novos tratamentos para hipertensão arterial pulmonar. Devido ao uso de isoflurane, Sugen e/ou MCT neste modelo, os equipamentos de proteção individual devem ser usados o tempo todo.