Immunology and Infection
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
En murine modell av Dengue virus-indusert akutt viral encefalitt-lignende sykdom
Chapters
Summary April 28th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Her presenterer vi en protokoll for å skape en immunkompetente ICR (Institute of Cancer Research) murine modell av sentralnervesystemet infeksjon for å vise utviklingen av nevropati. Overvåking av akutte virus encephalitic lidelser med identiske sykdoms resultater kan utføres for å vise Dengue virus induserte nevropati i vivo.
Transcript
Denne protokollen av en sykdom modell du ser dengue virusinfeksjon i hjernen bli en in vivo plattform for screening viral og vert vektorer forbundet med nevropatogenese. I motsetning til tidligere modeller bruker våre modeller infeksjonsverktøy med en lav viral titer, for å infisere immunkompetent Institute of Cancer Research som suger mus for encephalitic-lignende sykdomsproduksjon. Å demonstrere prosedyren vil være Ting-Jing Shen, en ph.d.-kandidat fra laboratoriet mitt.
Før infeksjonsprosedyren startes, må det fortynnes ikke-tilpassede dengueviruset to lager, til en gang 10 til de femte plakkdannende enhetene per 40 mikroliter med RPMI 1640 middels konsentrasjon. Deretter legger du en 0,3 milliliter sprøyte utstyrt med en 30 gauge nål med 10 mikroliter fortynnet virus. Og en 0,3 milliliter sprøyte utstyrt med en 30 gauge nål, med 30 mikroliter virus per dyr.
For intercerebral levering av viruset, trykk orakelet mellom tommelen og pekefingeren for å forsiktig begrense en syv dagers gammel suckling Institute of Cancer Research mus i en utsatt posisjon og injisere 10 mikrolitervolumet av fortynnet virus i lambdaområdet, i skjæringspunktet mellom sagittal og lambdoid sutur. Etter intercerebral injeksjon, bruk tommelen og pekefingeren til å holde musen i liggende stilling, og forsiktig intraperitoneally, injiser 30 mikrolitervolumet av fortynnet virus, inn i murine magen. For å score sykdomsprogresjonen, tilordne en score på null til fem til hver inokulert mus daglig, i henhold til karakteren av akutte virale encefalittlignende sykdommer, og plott scorene for hver dag som en kurvebasert figur, ved hjelp av gjennomsnittlig pluss og minus standardavviket for de daglige testresultatene i hver gruppe.
Sammenlignet med kroppsvektendringer målt i mock, medium bare inokulerte mus, dengue virus inoculated dyr viser en reduksjon i kroppsvekt på hvert tidspunkt i løpet av studien. I tillegg viser denguevirus infiserte dyr en betydelig økning i pukkel ryggstillinger, limbiske anfall, limbisk svakhet, lammelse og død sammenlignet med symptomene som vises ved mock inoculated dyr. Faktisk viser dengueinfiserte mus en tidsavhengig reduksjon i overlevelsesrater som ikke observeres hos mock inoculated dyr, som bekrefter etableringen av en smittsom modell av denguevirus i sentralnervesystemet som demonstrerer utviklingen av akutte virale encefalittlignende sykdommer hos mus.
Punktering av feil sted kan føre til nåleblokkering ved poengsummen og overløp av virusoppløsningen utenfor hodet, noe som resulterer i mislykket injeksjon og en mislykket infeksjon. Etter prosedyren kan hjerneprøver høstes for patologisk skade, immuncelleinfiltrasjon og viral replikasjonsanalyse ved henholdsvis hematoksylin og eosinfargingsstrømcytometri og plakkformasjonsanalyse. Vår immunkompetent murine modell, gir en plattform for å utforske de patogene mekanismene for dengue virusinfeksjon, for utvikling av dengue virusvaksiner, eller anti-dengue virus medisiner.
Dengue virus er et biosikkerhetsnivå to patogen, og som sådan bør alle eksperimenter med dette viruset fullføres i et kvalifisert dyrebiosikkerhetsnivå to laboratorium.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
