Mesures automatisées de sommeil et de l’activité locomotrice dans Agassizii mexicain

Ce protocole peut être utilisé pour quantifier le sommeil et l’activité dans n’importe quelle population de poissons et a le potentiel d’augmenter le nombre de systèmes modèles utilisés pour étudier la régulation du sommeil. L’avantage de cette technique est sa flexibilité. Par exemple, les poissons peuvent être suivis dans une variété de tailles d’arénas ou dans des expériences logées ment ou en groupe.

Une force de mesurer le sommeil dans ce système est l’amenability de la méthode pour le médicament à haut débit ou le criblage génétique. Nous avons appliqué cette méthode à l’étude de l’évolution du sommeil dans deux populations différentes de poissons des cavernes qui démontrent des phénotypes du sommeil radicalement différents. Bien qu’il puisse être difficile d’établir un système d’imagerie comportementale, notre système fournit une méthode rentable pour l’étude des poissons larvaire et adultes.

Pour construire le système pour suivre avec précision le comportement locomoteur pour étudier le sommeil et les rythmes circadiens dans larvaire A.mexicanus, utilisez 0,33 centimètre d’épaisseur acrylique signe blanc pour construire une plate-forme pour le système de suivi larvaire. Placez la plate-forme d’enregistrement sur le dessus de l’évier de chaleur carré allumé sur lequel les arènes contenant du poisson résideront pendant les expériences de suivi comportemental, et placez un deuxième acrylique à l’intérieur de la boîte entre les lumières dans le logement animal pour diffuser l’infrarouge pour un éclairage et un contraste optimaux. Placez toute la phase de suivi larvaire et l’éclairage mis en place dans un tube en plastique fermé.

Utilisez un outil rotatif pour retirer l’objectif d’une webcam adaptée à l’expérimentation. Retirez les petites vis à l’arrière de la caméra pour enlever le boîtier intérieur, et retirez les petites vis à l’intérieur du corps de la caméra pour desserrer le reste de l’objectif. Utilisez un petit tournevis pour enlever toutes les parties du boîtier de la lentille qui sont laissées après avoir coupé la lentille.

Et retirez la diode électroluminescente bleue sur la partie supérieure de l’appareil couplé à la charge ou du boîtier CCD. Ensuite, retournez le boîtier intérieur à son orientation d’origine avant de visser les deux vis extérieures dans leurs positions d’origine. Utilisez une petite scie pour acheminer l’intérieur de l’appareil photo pour permettre à l’appareil photo d’être équipé d’un morceau de routage en plastique arrondi lissant le plastique supplémentaire jusqu’à ce qu’il puisse accompagner un adaptateur de lentille.

Installez un filtre de passage infrarouge à l’intérieur de la caméra aussi près que possible du CCD sans entrer en contact direct avec la caméra, et vissez l’adaptateur d’une lentille fixe de 35 millimètres à l’avant de la caméra à l’arrière de l’objectif. Placez ensuite la caméra et l’objectif dans le trou percé dans le couvercle en haut du tube qui abrite la scène et les lumières, et fixez l’USB à l’ordinateur sur lequel les animaux seront enregistrés. Pour construire un système de sommeil pour les poissons adultes, coupez d’abord des bandes infrarouges à des intervalles d’environ 46 centimètres.

Et placez un 46 par cinq par 0,32 centimètre 9%lumière passer feuille acrylique signe blanc directement en face de chaque bande de lumière infrarouge pour diffuser la lumière infrarouge. Placez ensuite tous les réservoirs sur un support qui supporte l’éclairage infrarouge monté à l’arrière, et utilisez des séparateurs en plastique opaques et des réservoirs en verre de 10 litres pour créer des arènes individuelles. Pour enregistrer l’activité locomotrice des poissons tetra mexicains placer le jour quatre à six poissons post-fertilisation dans les puits individuels d’une plaque de tissu de 24 puits, et jours 20 à 30 après la fécondation dans les puits individuels d’une plaque de tissu de six puits.

Pour enregistrer le sommeil et l’activité des tétras adultes dans une maison sociale jusqu’à cinq adultes par réservoir de 10 litres avec ou sans les diviseurs. Dans cette expérience représentative, les poissons larvaux de trois populations indépendantes de poissons des cavernes ont montré une réduction significative du sommeil par rapport aux poissons de surface. Cette production de sommeil est constante à travers tous les âges testés que le sommeil a également été considérablement réduit chez les poissons adultes Pachon, Molino, et Tinaja grotte par rapport aux poissons de surface.

Notamment, les logements sociaux ont fortement réduit le sommeil dans les poissons de surface sans affecter le sommeil dans les poissons des cavernes de Pacho probablement en raison d’un effet de sous-sol dans les populations de poissons des cavernes. Lors de l’enregistrement du poisson, il faut veiller à ce que l’éclairage de la caméra soit optimal pour améliorer le signal du poisson par rapport à l’arrière-plan. Un certain codage de ligne de commande de base est nécessaire pour ce protocole qui est entièrement décrit dans le texte et devrait être approprié à n’importe quel réglage de laboratoire.

Ce protocole a conduit à de nombreuses questions sur l’évolution du sommeil et est actuellement utilisé pour les écrans de drogue, suivre le comportement du sommeil, et de comprendre comment le comportement social affecte le sommeil.