Journal
/
Genetics
/
Usando o Sniper-Cas9 para minimizar efeitos fora do alvo de CRISPR-Cas9 sem perda de atividade no alvo através de evolução dirigida
JoVE Journal
Genetics
This content is Free Access.
JoVE Journal Genetics
Using Sniper-Cas9 to Minimize Off-target Effects of CRISPR-Cas9 Without the Loss of On-target Activity Via Directed Evolution

Usando o Sniper-Cas9 para minimizar efeitos fora do alvo de CRISPR-Cas9 sem perda de atividade no alvo através de evolução dirigida

DOI:
10.3791/59202-v

•

11:37 min

•

February 26, 2019

•

, , ,
1ToolGen

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:45Positive and Negative Screening for Evolving Cas9
  • 04:47Delivery of Cas9 as an RNP with Truncated sgRNA
  • 06:17RNP Delivery
  • 07:27Transfection of Plasmids Encoding Sniper-Cas9 and sgRNA
  • 09:01Targeted Deep Sequencing for the Analysis of On-target and Potential Off-target Sites
  • 09:29Results: Analysis of Sniper-screen, On-target and Off-target Activities
  • 10:37Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Aqui, apresentamos um protocolo para otimizar CRISPR-Cas9 para alcançar uma maior especificidade sem perda de atividade no alvo. Usamos uma abordagem de evolução dirigida chamada Sniper-tela para encontrar um mutante Cas9 com as características desejadas. Franco-atirador-Cas9 é compatível com truncado RNAs single-guia e entrega em um formato ribonucleoprotein, conhecidas estratégias para atingir maiores especificidades.

Tags

CRISPR-Cas9Off-target EffectsDirected EvolutionSniper-Cas9On-target ActivitySpecificityLibrary ScreeningTherapeutic DevelopmentCas9 VariantsY-type Cas9ElectroporationCompetent Cells

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Processo para o Adaptive Laboratório Evolução de microrganismos utilizando um quimiostato

Integração de alvo CRISPR/Cas9-mediada na Vivo usando uma estratégia de baseada em juntar-se mediada por homologia final

CRISPR/Cas9 Gene edição para fazer condicional mutantes de humano parasita da malária por p. falciparum

Proteína endógena de marcação em humanos induzida por células-tronco pluripotentes usando CRISPR/Cas9

CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteína-mediada por Gene preciso de edição por tubo Electroporation

Introduzindo um nocaute genético diretamente no estágio Amastigote do Trypanosoma cruzi usando o sistema crispr/Cas9

Geração de modificações genómicas definidas usando CRISPR-CAS9 em células-tronco pluripotentes humanas

Investigação do papel transcricional de um silenciador intrônico RUNX1 por crispr/Cas9 Ribonucleoproteína em células de leucemia mielóide aguda

Identificação do receptor de superfície celular usando telas genéticas CRISPR/Cas9 em escala de genoma

In Vitro Evolução dirigida de uma endonuclease de restrição com especificidade mais rigorosa

Read Article