Neuroscience
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Facial nervkirurgi i råtta modell för att studera axonal hämning och regenerering
Chapters
Summary May 5th, 2020
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Detta protokoll beskriver en reproducerbar strategi för facial nerv kirurgi i råtta modellen, inklusive beskrivningar av olika inducible mönster av skada.
Transcript
Detta protokoll kan hjälpa forskare att studera resultat efter ansiktsnerven skada och metoder för att förbättra förnyelse över många olika parametrar. Den största fördelen med denna teknik är att råttans anatomi tillåter enkel åtkomst till ansiktsnerven, och dess storskalighet gör det möjligt för oss att studera alla relevanta skademönster. Tillämpningarna av denna teknik sträcker sig mot rehabilitering av patienterna efter facial nerv skada.
Som regenerativ potential råttan ger en reproducerbar och koncis experimentell modell. Och denna metod kan ge insikt i kirurgiska och medicinska terapier för ansiktsnervpares eller förlamning. Och det är översättningsbart till andra huvud och hals modeller eller andra perifera nerver.
Att arbeta under mikroskop med hjälp av båda händerna kan vara utmanande. Jag rekommenderar att öva med hjälp av binokulär version under mikroskopet innan du försöker en ansiktsnerv dissektion. Efter att ha bekräftat en brist på svar på tå nypa, applicera salva på råttans ögon och raka operationsområdet.
Upprätta en metod för råttidentifiering och placera en rulle gasväv under halsen. Desinficera den exponerade huden med tre alternerande klorhexidin och 70%etanolskrubber och placera råttan under ett stereomikroskop. Manipulera ipsilateral örat i en främre-bakre riktning för att bestämma den naturliga vikning av postauricular huden.
Använd ett tal 15 blad för att göra en två till tre millimeter snitt i postauricular veck. Planeringen och placeringen av snittet är de mest kritiska stegen för att säkerställa tillförlitlig identifiering av ansiktsnerven samtidigt som sårstorleken minimeras. Rakt på sak dissekera genom den omedelbara subkutana fascian och placera ett mikro-Weitlaner-upprullningsdon för att förstärka vävnadsexponeringen.
Identifiera den främre digastric muskeln som den färdas i en sämre-till-överlägsen riktning mot dess införande längs skallen bas. Sprid försiktigt genom muskelmagen längs muskelinsättningspunkten för att avslöja senan i den främre digastric magen. Senan kommer att visas som en filmig vit process som härrör från muskeln med en fast insättning på skallen bas.
Efter identifiering av den främre digastric muskeln och dess sena, justera Weitlaner upprullningsdonet att ytterligare dra tillbaka muskeln magen. Den utsatta regionen är det tredimensionella utrymme där ansiktsnervens huvudstam ligger. Dissekera längs nerven i en sämre riktning distally från utgången av stylomastoid foramen.
För att framkalla ett mönster för krossskada, använd släta uppjämna juvelerares tyngre att stadigt greppa och komprimera nerven tillämpa konstant och reproducerbart tryck i 30 sekunder för att säkerställa en lämplig krossa skada. För en enkel transection, ta tag i den omedelbara epineurium överlydning av nerven med fintandade tlyktor, och använda skarpa mikrospetsarer för att rent transect nerven vid önskad punkt med ett enda snitt. För en nervklyftmodell, använd justerbara bromsok för att ställa in önskad nervnervspaltlängd för att säkerställa liknande skademönster mellan djur och transektera nerven som just visats.
Efter att den experimentella skadan har levererats, Bevattna såret med steril koksaltlösning och torka vävnaden med steril gasbinda. innan hudanstängningen stängs enligt institutionella riktlinjer. Här, live imaging av huvudstammen i ansiktsnerven med en krossa skada cirka två till tre millimeter distala till grenen punkt för den första PES i en vuxen transgen Thy1-GFP råtta.
Bedömning av gradvis återlämnande av fluorescens vid en, två, tre och fyra veckor efter skada kan användas som en markör för övervakning av nervregenerering i dessa transgena djur. Histomorphometric analys kan användas för att erhålla tvärsnittsbilder av marginella mandibular division tillåter kvantifiering av axonal diameter, mängd skräp, nerv fiber, andel av nerv, och densitet mätningar. Det är viktigt att ofta justera placeringen av upprullningsdonet efter behov för att säkerställa att de relevanta anatomiska nerverna syns när ansiktsnerven identifierars.
Efter detta förfarande de relevanta nerver och muskler kan skördas för immunohistochemical analys för att bedöma graden av regenerering i förhållande till andra experimentella grupper. Efter dess utveckling, denna teknik har banat väg för forskare att studera de funktionella resultaten efter ansiktsbehandling nerv skada. Specifikt hur man ska effekt fenomenet synkinesi.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
